论文部分内容阅读
本课题以1kg、20kg、40kg、60kg和90kg左右的杜长大猪为研究对象,通过体外细胞培养和饲养试验,研究了猪FoxO1和SOCS3基因表达的组织特异性、不同生长阶段的表达规律及其与脂肪沉积的关系,并探讨了RES对猪前体脂肪细胞FoxO1和SOCS3基因表达调控的影响。取得的主要研究结果如下：1.根据已报道的猪FoxO1、SOCS3和内标18S rRNA基因序列,克隆得到相应的基因片段,与Genbank登陆的相应片段(登录号分别为DQ243692、AY785556和AY265350)同源性分别为98%、100%和100%。以此为基础,构建了适合于相应基因序列的优化半定量RT-PCR法,用于FoxO1和SOCS3基因表达的测定。2.选取胎次相同的20kg左右的杜长大猪为试验对象,探讨FoxO1和SOCS3基因在皮下脂肪、腹部脂肪、肠系膜脂肪、脑、心脏、肝脏、脾脏、肾脏、肌肉、十二指肠和胰脏中的表达差异。结果表明,猪FoxO1和SOCS3基因在所检测的组织中均有不同程度的表达,其中,FoxO1基因在肝脏、肠脂和肌肉中的表达量较高,在肾脏、脾脏、心脏和胰脏中表达量次之,脑、皮脂、十二指肠和腹脂中表达量较低；SOCS3基因在心脏和脂肪组织中的表达量较高,脑和十二指肠中表达量较低。3.选取胎次相同的1kg、20kg、40kg、60kg和90kg的杜长大猪各三头屠宰,进行胴体分割,测定脂肪率,并取皮下、腹部和肠系膜脂肪组织,探讨猪FoxO1和SOCS3基因在不同生长阶的表达规律及其与体脂沉积的关系。结果表明：从1kg-90kg,杜长大猪脂肪率随着体重的增加显著增加(P<0.01)；FoxO1基因肠系膜脂肪组织中mRNA表达水平与脂肪率呈显著正相关(r=0.837,P<0.05)；SOCS3基因在三种脂肪组织中的表达均随体重增加而增加,且在皮下脂肪(r=0.882,P<0.05)和肠系膜脂肪(r=0.976,P<0.01)中mRNA表达水平与脂肪率均成显著正相关。4.分离培养7日龄杜长大仔猪前体脂肪细胞,设空白对照组(完全培养基+0μmol/L RES)、RES1组(完全培养基+40μmol/L RES)、RES2组(完全培养基+80μmol/LRES)和RES3组(完全培养基+120μmol/L RES)四个处理组,研究RES对猪前体脂肪细胞增殖分化及FoxO1和SOCS3基因表达调控的影响。结果表明：RES能显著抑制猪前体脂肪细胞增殖和分化,其中MTT法检测细胞增殖结果显示,RES处理24h后,RES1组、RES2组和RES3组与对照组相比均显著降低脂肪细胞数目,OD值分别下降22.30%(P<0.05)、36.82%(P<0.01)和42.50%(P<0.01)；油红O染色法检测细胞分化结果得出,RES处理24h后,与对照组相比,RES1组、RES2组和RES3组均明显抑制脂肪细胞分化,OD值分别下降25.74%(P<0.05)、60.78%(P<0.01)和39.71%(P<0.01)。RES也能明显下调FoxO1基因在前体脂肪细胞中表达,且与RES浓度呈剂量依赖关系,与对照组相比,RES处理24h后,RES2组和RES3组FoxO1基因表达量分别下降34.30%(P<0.05)和42.47%(P<0.01)。对前体脂肪细胞中SOCS3基因表达研究表明,RES对其表达具有上调作用,与对照组相比,RES处理24h和48后,RES2组SOCS3基因表达量分别增加32.53%(P<0.05)和46.71%(P<0.01)。5.通过对猪FoxO1与SOCS3基因表达规律与脂肪沉积的关系以及RES对FoxO1与SOCS3基因表达调控的影响的研究,揭示RES可能主要通过下调FoxO1基因和上调SOCS3基因表达,进而抑制脂肪细胞增殖分化,减少脂肪沉积。