猫传染性腹膜炎病毒（Feline infectious peritonitis virus,FIPV）属于猫冠状病毒科猫冠状病毒属（Feline coronavirus,FCo V）的一类RNA病毒。FCo V包括猫传染性腹膜炎病毒（FIPV）和猫肠道冠状病毒（FECV）两种生物型。目前,对于FIPV,我国的流行病学研究较少,对于FIPV尚无有效疫苗,缺乏有效的检测方法,严重影响者猫科动物的健康。为此,本研究建立两种PCR检测方法,并结合测序分析技术,可进一步提高猫传染性腹膜炎病毒的检测精准性,为此病的防治提供科学的依据。本论文的研究内容包括以下三个方面:（1）猫传染性腹膜炎病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法建立旨在建立检测FIPV的实时荧光定量RT-PCR方法,通过对GenBank中FIPV N基因序列比对,选取N基因为靶基因,利用生物学信息软件,通过对N基因的序列分析,并针对N基因的保守区域设计特异性引物及TaqMan探针,建立以N基因为检测基因的实时荧光定量RT-PCR方法,检验方法的特异性、灵敏度和稳定性。标准曲线方程为y=38.445-3.3083x,可信度（R~2）为0.9989,扩增效率（E）为100.5%,最低检测限为3.4×10~1copies/μL,重复性变异系数（CV）不超过5%。利用建立的荧光定量PCR方法检测FIPV、狂犬病毒（RV）、猫疱疹病毒（FHV）、猫杯状病毒（FCV）、猫细小病毒（FPV）、犬流感病毒（CIV）、犬瘟热病毒（CDV）,无交叉反应,具有良好特异性。此方法无法区分猫传染性腹膜炎病毒与猫肠道冠状病毒。建立的猫传染性腹膜炎病毒实时荧光定量PCR方法具有灵敏性高、重复性好、特异性强等特点,可用于猫传染性腹膜炎病毒的的快速诊断和检测。（2）猫传染性腹膜炎病毒RT-PCR检测方法建立针对FIPV的M基因设计一对特异性引物,目的片段大小为522bp。优化了RT-PCR的退火温度,并进行了特异性试验和灵敏度试验,FIPV的最佳退火温度为53℃,且与其他病毒无交叉反应,包括狂犬病毒（RV）,猫疱疹病毒（FHV）,杯状病毒（FCV）,猫细小病毒（FPV）,犬流感病毒（CIV）,犬瘟热病毒（CDV）证明该RT-PCR检测方法特异性良好,FIPV的最低检测量分别为1.9x10~4copies/μL,结合扩增产物基因测序,可有效区分猫肠道冠状病毒,提高检测方法的精准性。（3）猫传染性腹膜炎病毒实时荧光定量RT-PCR试剂盒试制试制FIPV实时荧光定量RT-PCR检测试剂盒。采用双层纸板包装,制成猫试剂盒的外包装,再根据核心试剂的大小以及样品数量的多少,设计FIPV实时荧光定量RT-PCR试剂盒的大小。FIPV实时荧光定量RT-PCR试剂盒内包括检测的核心试剂、阳性对照DNA,阴性对照DNA和无菌水。试剂盒内含有25个PCR反应管及操作步骤说明书一份。按照25μL体系将稀释好的引物与2 x PCR Mix及dd H2O混合,参照说明书进行试验。试制试剂盒取3批次进行批内、批间重复性试验,Ct值变异系数均低于5%,具有良好的重复性。试剂盒放置于-20℃保存,分别取0、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月的试剂盒对4个阳性株模板、2个阴性模板及空白对照进行检测,3批次试剂盒检测结果符合要求。