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慢性湿疹(chronic eczema)具有反复性,难治性的发病特点,其发病机制复杂。西药副作用大,疗效局限,中医辨证论治有优势;研究湿疹的发病机理,探索中医药治疗湿疹,具有重要的理论意义和应用价值。1.二硝基氯苯诱导C57小鼠慢性湿疹模型复制①目的:确定二硝基氯苯(2,4-Dinitrochlorobenzene,DNCB)诱导C57小鼠慢性湿疹模型的最佳造模浓度。②方法:于d1、d2,将7%DNCB丙酮溶液50ul涂于小鼠腹部皮肤致敏。于d6,以0.26%～0.96%(k=0.316)9个梯度浓度的DNCB丙酮溶液lOOul,均匀涂抹于小鼠背部皮肤激发,每隔3d一次,共4次。对照组涂抹100ul丙酮溶液。观察皮肤大体变化,形态计量表皮体积比,回归DNCB造模的半数有效浓度(ED50)。⑧结果:DNCB对小鼠表皮体积比的作用呈剂量依赖性,其ED50为37.25,拟合的量效方程为 Y=0.04+0.82/[1+10(28.15-17.92x)],置信区间为 33.04～41.99,R=0.95。④结论:成功复制了 DNCB诱导的小鼠慢性湿疹模型DNCB;最佳造模浓度为0.37%。2.鲜肤膏及其拆方防治慢性湿疹的量效关系①目的:探究鲜肤膏防治慢性湿疹小鼠模型的量效关系。②方法:于d1、d2,将7%DNCB丙酮溶液50ul涂于小鼠腹部皮肤致敏。于d6,以0.37%的DNCB丙酮溶液100ul,均匀涂抹于小鼠背部皮肤激发,每隔3d一次,共4次。于激发日起,鲜肤膏组、地乌膏组、鲜肤膏去地乌组分别给予梯度剂量鲜肤膏(生药量11.71～11662.50 mg.kg-1·d-1,k=0.316),地乌膏(生药量 0.53～530.12 mg.kg-1·d-1,k=0.316),鲜肤膏去地乌膏(11.18～11132.40 mg·kg-1·d-1,k=0.316)均匀涂抹于小鼠背部皮肤予以治疗。模型组涂抹基质(60mg/只)。HE染色观察病理特点,ELISA检测血清IL-4、IL-13含量;Prism5.0非线型可变斜率回归计算半数有效剂量(ED50),比较鲜肤膏组、地乌组、鲜肤膏去地乌组的药效,观察地乌的配伍增效作用。③结果:鲜肤膏组、地乌组、鲜肤膏去地乌组药效具有剂量依赖特征,量效曲线呈“S”型。鲜肤膏组疗效最优,显著降低表皮体积比(ED50为377.90 mg.kg-1·d-1),降低血清IL-4(ED50为 198.70 mg·kg-1·d-1)、IL-13(ED50为117.60 mg·kg-1·d-1)含量。与鲜肤膏组比较,地乌组与鲜肤膏去地乌组的量效曲线分别右移。④结论:鲜肤膏及其拆方均能有效治疗慢性湿疹;鲜肤膏的疗效最优;地乌有配伍增效作用。其最佳治疗剂量为377.90 mg.kg-1·d-1。3.鲜肤膏防治慢性湿疹的免疫药效及机制初探①目的:探讨鲜肤膏防治慢性湿疹的药效观察及机制初探。②方法:于d1、d2,将7%DNCB丙酮溶液50μl涂于小鼠腹部皮肤致敏。于d6,以0.2%DNCB丙酮溶液100μl,均匀涂抹于小鼠背部皮肤发敏,每隔3d一次,共8次。分别给予他克莫司,除湿止痒软膏,鲜肤膏高剂量(5180.OOmg·kg-1·d-1)、中剂量(1640.00 mg·kg-1·d-1)、低剂量(519.OOmg.kg-1·d-1),地乌皂苷(2.50 mg·kg-1·d-1),蛇床子素(5.20 mg·kg-1·d-1),吴茱萸碱(4.00mg·kg-1·d-1)均匀涂抹大鼠背部皮损予以治疗。模型组涂抹基质。观察其皮损大体变化,HE染色观察病理特征,形态计量表皮体积比,ELISA检测血清IL-4、IL-13含量,免疫组化检测IL-4R,p-JAK1,p-Stat6,角蛋白K6原位蛋白表达量。③结果:药效观察:(1)大体观察:与对照组相比,模型组大鼠皮损红斑,水肿;与模型组相比,给药组均可不同程度上改善大鼠湿疹皮损的红斑,水肿等临床表现。(2)病理观察:与对照组相比,模型组病理表现为湿疹皮损处表皮增厚,棘细胞层肥厚,角质层可见明显的角化不全及过度角化;与模型组相比,各给药组明显改善了大鼠湿疹皮损的病理改变。(3)表皮体积比:与对照组相比,模型组大鼠皮损的表皮体积比显著增加;与模型组相比,给药组均能有效降低表皮体积比,其中他克莫司疗效最优;与阳性药组相比,鲜肤膏高剂量组较他克莫司组无差异。(4)血清IL-4.:与对照组相比,模型组血清IL-4显著升高;与模型组相比,给药组均能有效降低血清IL-4,且疗效无差异。(5)血清IL-13:与对照组相比,模型组血清IL-13显著升高;与模型组相比,各给药组降低血清IL-13,其中他克莫司组疗效最优;与阳性药组比较,鲜肤膏中、低剂量组,地乌皂苷组、蛇床子素组较他克莫司组无差异。(6)K6:与对照组相比,模型组角蛋白K6显著升高;与模型组相比,给药组的角蛋白K6的原位蛋白表达量显著降低,其疗效无差异。机制初探:(1)IL-4R:与对照组相比,模型组角质形成细胞的IL-4R的原位蛋白量升高;与模型组相比,给药组能不同程度降低IL-4R的阳性表达;与阳性药组相比,蛇床子素组较他克莫司组无差异。(2)p-JAK1:与对照组相比,模型组角质形成细胞的p-JAK1的原位蛋白表达量明显升高;与模型组相比,给药组的p-JAK1的阳性蛋白表达量显著降低;与阳性药相比,鲜肤膏高、中、低剂量组,地乌皂苷组较他克莫司组、除湿止痒软膏组无差异。(3)p-STAT6:与对照组相比,模型组角质形成细胞p-STAT6的原位蛋白表达量显著升高;与模型组相比,各给药组p-STAT6的阳性表达量降低,各组无明显差异。④结论:鲜肤膏可干预IL-4R-JAK1-STAT6信号通路转导,抑制角质形成细胞的异常增殖与活化,防治慢性湿疹。