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目的:本研究旨在探讨不同浓度大蒜素对星形胶质细胞增殖和迁移的影响。方法:1.三种大鼠大脑皮质星形胶质细胞原代培养方法比较。30只新生24小时以内的Wistar大鼠,随机分成3组,每组10只。每组称取等量皮质。A组:通过胰蛋白酶消化+涡旋振荡、差速离心+振荡法;B组:通过胰蛋白酶消化、差速贴壁+恒温摇床振荡法;C组:通过机械吹打、差速贴壁+恒温摇床振荡法;定期显微镜下观察细胞贴壁情况、生长状态、生长速度,纯化后每组计数细胞数目,测定细胞纯度。本实验重复三次,综合上述结果对A组培养方法进行评价。2.探讨不同浓度大蒜素对星形胶质细胞增殖和迁移的影响。以第一部分A组方法进行星形胶质细胞原代培养、测定纯度。传代后以不同浓度大蒜素(对照组0 μg/ml,A 组 50μg/ml,B 组 100μg/ml,C 组 200 μg/ml)干预 24 小时,通过CCK8及划痕实验,评价不同浓度大蒜素对星形胶质细胞增殖及迁移能力的影响。结果:1.1各组同等细胞密度下提取所得细胞悬液量:A组41.8±0.15ml,B组41.3±0.1ml,C 组 41.5±0.1ml,三组比较 F=11.3,P=0.009,两两组间比较:PA/B=0.034,PA/C=0.015,PB/C=0.074。A组与B、C组间存在统计学差异;BC组之间无统计学差异。1.2显微镜下观察:24h后A组和B组细胞已基本贴壁,C组约有30%-40%呈游离状态且第一次换液时仍有少量未贴壁。各组主要细胞第三天开始出现小突起,随时间延长细胞体积变大、突起变多。第七天都具有了星形胶质细胞典型形态学特征。整个观察期间A组细胞形态较为均一;B组和C组可以见到少量杂细胞。1.3各组收获细胞数:A组(14.21±0.05)x107B组(13.96±0.03)x107C组(13.43±0.03)x107。三组比较F=294.118,P<0.001,两两组间比较:PA/B=0.013,PA/C<0.001,PB/C=0.001。三组间存在统计学差异。1.4细胞纯度测定:A 组:97.87%±0.49%B 组:95.90%±0.45%C 组:96.38%±0.59%。三组之间纯度结果分析:F=59.258,P<0.001,具有统计学差异;两两比较:PAB<0.001,PA/C<0.001,PB/C=0.053。A组纯度最高且与B、C组间具有显著的统计学差异;B、C组之间无统计学差异。2.1 CCK8法结果:450nm对照组的0D值为1.12±0.03,A、B、C组的0D值分别为0.85±0.03、0.26±0.03、0.21±0.02。对照组及各药物组0D值的差异性具有显著的统计学意义(F=918.4,P<0.001)。两两进行组间比较:P对照/大蒜素均<0.001,PA/B=0.000064,PA/C=0.000044,PB/C=0.091056。A组与B、C组之间存在统计学差异;B组与C组之间无统计学差异。2.2划痕实验结果:不同浓度的大蒜素干预下,6h、12h、24h划痕的愈合率有明显差异性,具有统计学意义,P均<0.001。随着浓度的升高,时间的延长,大蒜素对星形胶质细胞的迁移能力抑制作用明显增强。D组发现部分星形胶质细胞漂浮死亡,随着时间延长逐渐增多。结论:1.胰酶消化、差速离心+振荡进行星形胶质细胞原代培养,操作简单,提取所得细胞数最多,纯度最高,收获细胞数也最多,值得推广。2.大蒜素对星形胶质细胞的增殖和迁移能力有抑制作用,并在一定浓度范围内与浓度呈正相关,200 μg/ml的大蒜素表现出了一定的细胞毒性。