隐孢子虫（Cryptosporidium）是人兽共患的顶复门原虫,感染宿主后导致中等到重度腹泻,严重时导致死亡。隐孢子虫包含近40个虫种,其中微小隐孢子虫（Cryptosporidium parvum）是最重要的人兽共患虫种,该虫种内又包含不同的亚型家族。比较基因组学分析表明,微小隐孢子虫不同亚型家族的基因组之间存在一些高度多态性的区域,其中包括一个编码蛋白酶P60的cgd6＿60基因,并且该基因所在区域存在高水平的遗传重组,因此推测该基因编码的P60蛋白在隐孢子虫生活史中起了重要作用。为了解P60蛋白的生物学功能,进行了如下研究:1)P60蛋白的生物信息学分析。比较基因组学分析发现,cgd6＿60基因为高度多态性位点,在微小隐孢子虫与其它虫种之间以及微小隐孢子虫的不同亚型之间均表现出高度多态性。进一步通过生物信息学分析对P60蛋白的结构进行预测,发现P60蛋白含有多个不同的功能结构域。在二级结构中,P60蛋白含有α螺旋、β折叠、β转角以及无规卷曲四种结构,其中C端大部分区域为无规卷曲结构,且位于全长蛋白的无序区域。除此之外,C端蛋白是P60蛋白的功能中心,包含了全长蛋白所有功能域,包括低复杂区域（LCRS）、内重复区域（RPT1）和SCOP同源域。2)P60全长蛋白的表达。利用p ET-28a质粒与cgd6＿60全长基因构建重组质粒并转入大肠杆菌BL21 Condon Plus（DE3）-RIPL表达菌株中诱导蛋白表达,发现在169k Da有P60的全长蛋白,并且在上清液中表达。但由于该蛋白表达量低,经过反复尝试仍无法获得纯化蛋白,因此之后选择P60蛋白中功能结构域集中的C端蛋白（37k Da）进行功能解析。3)P60-C端蛋白的表达与功能验证。采用上述方法,对P60-C端蛋白进行了原核表达并制备针对重组蛋白的多克隆抗体。采用实时荧光定量PCR,检测该蛋白在隐孢子虫不同时期的表达水平。采用间接免疫荧光方法,对P60-C端蛋白在卵囊、子孢子以及胞内阶段的分布进行定位。通过中和试验,对P60-C端蛋白抗血清抑制虫体入侵的作用进行评价。结果表明,P60-C端蛋白表达产物包含37 k Da和55 k Da两个条带,蛋白质谱鉴定结果显示二者均为目的蛋白,其中55 k Da的片段可能是37 k Da片段的蛋白二聚体。该蛋白在入侵细胞后36 h处表达量最大,且主要定位于子孢子的顶部和中部,并在裂殖子阶段有表达。P60-C端蛋白抗血清对隐孢子虫入侵的中和效率为～31%。以上结果表明P60蛋白可能在隐孢子虫入侵中起了一定作用,但更多参与了隐孢子虫的胞内生长发育进程。本研究结果为进一步阐明隐孢子虫入侵和发育的分子机制,从而为隐孢子虫药物靶标的筛选奠定基础。