我们以南阳云阳蚕厂的柞蚕为研究对象，首先从得脓病致死的柞蚕尸体中纯化ApNPV的多角体，我们采用差速离心的方法，经过几轮洗涤离心后，得到了较为纯净的沉淀，即为ApNPV的多角体。在电子显微镜下观察，ApNPV多角体多呈四角形。接着我们对ApNPV多角体进行了切片并在透射电镜下观察，每个多角体中有多个核衣壳。然后采用传统的方法，弱碱裂解上一步纯化的ApNPV的多角体，经过超速离心，得到了ApNPV的病毒粒子，电镜下可以看到呈杆状的病毒粒子。 2006年，NCBI上公布了ApNPV全基因组序列，这为从基因水平研究ApNPV打下了基础。经过对全基因组序列分析，发现在ApNPV基因中没有p35的同源基因，但是有两个iap基因，iap1和iap2。由于并不是所有的iap基因都具有凋亡抑制的功能，因此，我们本研究的重点是探索ApNPV的两个iap基因是否具有凋亡抑制的功能。第一步是得到这两个基因，为此我们首先提取了ApNPV的基因组DNA，并以此为模板，以网上公布的序列设计引物，扩增了Ap-iap1和Ap-iap2，经测序鉴定正确。接着将这两个基因分别克隆到pIZT/V5-His载体上，这个载体具有IE2启动子。将同等量的构建好的质粒pIZT/V5-His-Apiap1、pIZT/V5-His-Apiap2分别转染Sf21细胞，再用放线菌素D诱导调亡，结果发现转染pIZT/V5-His-Apiap1的细胞没有出现凋亡的现象，而转染pIZT/V5-His-Apiap2质粒的细胞都出现明显的凋亡现象，DNA ladder和流式细胞仪分析也得到了同样的结果。我们又做了标记拯救试验，将重组质粒分别转染Sf9细胞后，加入AcMNPV△p35/pol+病毒，结果发现pIZT/V5-His-Apiap1可以拯救AcMNPV△p35/pol+在细胞中的复制，形成清晰的病毒多角体，而pIZT/V5-His-Apiap2质粒不能拯救AcMNPV△p35/pol+的复制。根据以上结果，可以说明ApNPV的Ap-iapl基因是个凋亡抑制基因，而Ap-iap2则不具有凋亡抑制功能。 为了进一步研究Ap-IAP1和IAP2的体外功能，需要大量表达蛋白。首先PCR扩增出两个基因，克隆到pET28b载体，用构建好的载体转化E.coli B121宿主菌，并用含有pET28b空载体的E.coli B121和没有质粒的E.coli Bl21作阴性对照。结果表明有重组质粒的E.coli B121的泳道中，分别有31KD和21KD的蛋白带，而在阴性对照的泳道中均没有出现正这两条带。为了鉴定此蛋白，我们用Ni2+亲和柱纯化融合蛋白，并用His标签的抗体进行Westernblot检测，结果呈阳性，说明为目的蛋白，为下一步蛋白功能的研究打下了基础。