论文部分内容阅读
目的:通过检测经顺铂(DDP)处理后的肺癌细胞增殖抑制率变化,以及肺癌细胞FANCC、FANCF、FANCLmRNA和蛋白表达水平的变化,研究FA/BRCA途径的DNA损伤修复功能在肺癌细胞对DDP耐药机制中的作用。
方法:体外培养肺癌细胞株A549、Calu-1和SK-MES-1,采用CCK-8法分别测定经不同浓度DDP处理三个肺癌细胞株24h、48h后的细胞增殖抑制率。用不同浓度DDP处理肺癌细胞后,收集细胞,分别提取总RNA和总细胞裂解物,采用实时荧光定量RT-PCR技术(QRT-PCR)测定三个肺癌细胞株中的FANCC、FANCF、FANCLmRNA表达,应用Westemblotting检测它们的蛋白表达。
结果:(1)肺癌细胞A549和Calu-1的细胞增殖抑制率均随DDP浓度和作用时间的不同而变化,呈剂量依赖性(P＜0.05)和时间依赖性(P＜0.05),细胞Calu-1、SK-MES-1的半数抑制浓度(IC50)明显高于细胞A549。
(2)用不同浓度DDP处理肺癌细胞A54924h后,与对照组相比,FANCCmRNA表达明显降低(P＜0.05),但在10μg/ml和20μg/ml浓度DDP处理48h后,FANCCmRNA表达明显增高(P＜0.05);肺癌细胞A549除在10μg/ml浓度DDP处理24h后FANCF和FANCLmRNA表达水平增高外,2.5-5μg/ml和20μg/ml浓度DDP时FANCF和FANCLmRNA呈无变化和低表达(P＜0.05)。肺癌细胞Calu-1经不同浓度DDP处理后的FANCC、FANCF和FANCLmRNA表达水平先增高后降低(P＜0.05)。用不同浓度DDP处理肺癌细胞SK-MES-124h后,FANCCmRNA表达水平先增高后降低(P＜0.05),但在5μg/ml和10μg/ml浓度DDP处理48h后,FANCCmRNA表达明显增高(P＜0.05);在5-10gg/ml浓度的DDP处理24h及48h后,FANCF和FANCLmRNA表达明显增高(P＜0.05)。
(3)肺癌细胞A549中的FANCC、FANCF和FANCL蛋白表达水平随DDP浓度增高呈进行性降低。而肺癌细胞Calu-1的FANCF蛋白表达水平在DDP浓度5-10gg/ml范围内较对照组明显增高。肺癌细胞SK-MES-1的FANCC、FANCF蛋白表达水平在DDP浓度5-20μg/ml范围内较对照组明显地增高。
结论:肺癌细胞Calu-1、SK-MES-1对DDP的耐药性显著高于肺癌细胞A549。肺癌细胞Calu-1和SK-MES-1对DDP耐药性增高的机制之一可能是FA/BRCA途径中FANCF和FANCC蛋白高表达的结果,FA/BRCA途径的DNA损伤修复功能在肺癌细胞对DDP耐药中发挥了一定的作用。