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肿瘤引流淋巴结(tumor draining lymph nodes, TDLN)可以作为过继免疫治疗中特异性细胞毒性T细胞(CTL)的一个重要来源。根据近年研究的结果显示，CTL激活需要双信号系统，即：肿瘤抗原致敏和抗原提呈细胞(APC)提供的共刺激因子。此前的增强TDLN杀伤活性实验中，有学者采取单纯IL-2诱导和肿瘤抗原再次刺激活化并以IL-2辅助的方法，均取得了一定的效果。但是上述方法均未解决共刺激信号缺乏的问题。我们设想根据“双信号激活理论”，在TDLN细胞中添加高表达共刺激因子的树突状细胞(DC)，从而为已致敏的前效应细胞(pre-effector cells)也就是已经获得第一类激活信号的T细胞提供激活所需要的第二类信号，提高其特异性杀伤能力。 我们采集肿瘤患者自体外周血贴壁细胞经IL-4、GM-CSF、TNF-α诱导使其成熟并给予自体肿瘤冻融抗原预致敏，以期产生具有一定数量及完善功能的DC，同时分离TDLN细胞，在含有IL-2培养体系中培养。然后，将TDLN细胞分为三组：(1)D-TDLN组：以加载肿瘤抗原的DC激活TDLN细胞；(2)Ag-TDLN组：以肿瘤冻融抗原激活TDLN细胞；(3)L-TDLN组：不加其他刺激作为对照组。比较不同条件下的TDLN细胞对不同肿瘤细胞系(胃腺癌细胞系KATO3和黑色素瘤细胞系A375)杀伤能力的差异。由于本实验的TDLN细胞均来自胃腺癌患者，对KATO3细胞 军医进修学院硕士论文 系有相对特异的杀伤能力，而对A375细胞系无特异性识别能力， 以之检验其非特异性杀伤能力。 根据实验结果可以看出各组pLN细胞对KAo3细胞系杀伤 能力均大于对A375细胞系的杀伤能力，而且具有明显的统计学意 义，说明TDLN细胞在体内己经被预致敏，具备特异性识别能力。 D－TDLN组与Ag－TDLN组，D－im组与L－TDLN组之间的对于 KATO3细胞的杀伤率存在显著性差异，而Ag－TDLN组与L－TDLN 组之间的杀伤率差异性不显著，即D－TDLN组细胞对KATO3细胞 的杀伤能力优于其他两组。说明以加载肿瘤抗原的DC激活TDLN 的方法优于肿瘤抗原联合IL－2或单纯使用几－2的方法。对于A375 细胞，各组细胞杀伤能力间没有明显差异，而且不同效靶比的杀 伤率也没有明显差异，说明添加 DC提高的是TDLN细胞的特异 性杀伤能力。 通过我们的实验观察，体外培养成熟并以自体肿瘤冻融抗原 致敏的DC代替TDLN中原有的受肿瘤抑制的DC增强了TDLN 的抗肿瘤活性，效果优于以往文献曾报道的肿瘤抗原联合IL－2或 单纯使用IL－2的方法。有可能作为一种有效的过继性细胞免疫治 疗的新方法。