肠道病毒EV71是引起手足口病(hand,foot and mouth disease HFMD)的主要病原体,其感染人群主要为婴幼儿,症状轻微者会出现斑丘疹和疱疹,而严重的患者会出现神经性系统疾病,如病毒性脑膜炎、脑炎、脑干脑炎和急性弛缓性麻痹等,严重威胁到公共安全。本论文采用经典的单克隆抗体技术,制备和筛选了针对EV71非结构蛋白靶标2A和表面结构蛋白靶标VP1的系列单克隆抗体,并对这些抗体进行了鉴定和初步的研究分析。1.利用原核表达的2A蛋白免疫小鼠,通过细胞融合筛选分泌2A特异性IgG的杂交瘤细胞株,并根据抗体类别转换机制,采用有限稀释法进一步筛选获得2A特异性IgA型杂交瘤细胞株2A5 IgA和5F11 IgA。利用小鼠腹水制备获得大量纯化的IgA和IgG单克隆抗体,通过体外Transwell系统极化上皮细胞测定IgA抗体通过上皮细胞转运活性及其对EV71病毒复制的影响。结果表明,这两株2A特异性抗体2A5 IgA和5F11 IgA均能通过上皮细胞内转运,并有效抑制病毒复制,且这种抑制效应依赖于IgA抗体的浓度。2.采用同样的杂交瘤技术路线也筛选获得9株VP1特异性IgG杂交瘤细胞株,并通过小鼠腹水制备纯化单克隆抗体。在Vero细胞中进行体外经典中和实验测定表明,这9株IgG均没有抑制病毒复制的经典中和活性,而在THP-1细胞中进行的体外经典中和实验观察到增强病毒复制的效应。其中两株C1 IgG和F4 IgG能显著增强病毒的复制。进一步通过构建VP1蛋白的截断克隆,初步确定了9株抗体的抗原识别表位区域,提示了VP1蛋白与抗体增强感染作用的相关性和可能的VP1蛋白相关区域,为进一步研究抗体增强EV71感染的现象和机制奠定了一定基础。