应用去细胞真皮基质联合富血小板血浆重建兔巨大肩袖损伤的实验研究

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1目的研究应用去细胞真皮基质联合富血小板血浆重建兔巨大肩袖损伤术后的早期组织形态学及生物力学变化,为解决巨大肩袖损伤无法修复的临床难题,提供实验依据。2材料与方法将58只成年雄性新西兰大白兔随机分为正常组(n=4),巨大肩袖损伤模型组(模型组,n=18),去细胞真皮基质治疗组(治疗A组,n=18),去细胞真皮基质联合富血小板血浆治疗组(治疗B组,n=18)。正常组不予任何处理,其余三组采用手术方法在大白兔双前肢冈上肌肱骨头大结节止点处形成1.5cm×1.5cm的肌腱缺损建立兔巨大肩袖损伤模型。模型组不予任何修补处理直接缝合皮肤;治疗A组用去细胞真皮基质修复冈上肌肌腱缺损;治疗B组应用去细胞真皮基质联合富血小板血浆(Platelet-rich plasma,PRP)修复冈上肌肌腱缺损。模型组及治疗A、B组分别于术后第4、8、12周各处死6只大白兔并取出双肩标本,其中2只兔标本进行组织形态学分析,另4只兔标本进行生物力学研究测试。3结果3.1大体像模型组术后第4,8周损伤处未见愈合,第12周可见少量瘢痕组织生长。两个治疗组术后第4周时可在手术区域中辨别去细胞真皮基质与周围肌腱组织,未见腱骨愈合;第8周时去细胞真皮基质被组织包裹;第12周时手术区域组织类似正常的肌腱组织。3.2组织学观察第12周时模型组在光学显微镜下呈增生杂乱的瘢痕组织。正常组成纤维细胞较少,胶原纤维粗大排列有序。在第4周时治疗A组在光学显微镜下组织学上虽无腱骨愈合与胶原纤维生长,但已有少量的成纤维细胞和大量的炎性细胞。在第8周时冈上肌肌腱缺损处出现胶原纤维和腱骨愈合,成纤维细胞出现增多,但胶原纤维较细,排列也比较杂乱;在腱骨结合处出现Sharpey纤维但比较疏松。在第12周时镜下成纤维细胞减少,胶原纤维增多变粗,排列较整齐呈一定的方向性;Sharpey纤维在腱骨结合处显著增多。术后第4周时B组成纤维细胞比A组多,镜下细胞数量也明显增多;第8周时B组可见成纤维细胞数量明显多于A组,胞核呈圆形或椭圆形,体积大,胶原粗细不等、纵横交错、分布杂乱。腱周的成纤维细胞及胶原纤维长入肌腱内部与肌腱原有的胶原纤维交错排列,Sharpey纤维也显著增多。第12周时治疗B组成纤维细胞少,胞核呈梭形,体积小,成行排列,两行细胞之间为被染成淡红色的胶原纤维,排列整齐、致密,略呈波浪状,形态接近于正常腱细胞,在腱骨界面有密集排列有序的Sharpey纤维出现。3.3生物力学研究结果显示两个治疗组肌腱最大负荷随时间呈持续上升趋势(各时间点之间比较,p<0.01)。同期各时间点两个治疗组肌腱最大负荷无显著统计学意义(p>0.05),但术后12周二者肌腱最大负荷仍显著低于正常组(p<0.05)。4结论巨大肩袖缺损不能自行愈合;应用去细胞真皮基质可修补巨大肩袖损伤;去细胞真皮基质中加入PRP后更有利于肌腱的生长。修复后再生的肌腱生物力学强度低于正常肌腱。
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