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第一部分 兔骨髓基质干细胞的体外分离及培养目的：从兔身上得到骨髓基质干细胞,为下一步试验提供研究材料奠定基础。方法：在无菌条件下从新西兰大白兔体内分离得到骨髓基质干细胞,观察细胞的形态,并用免疫荧光法鉴定骨髓基质干细胞中的CD44和CD34的表达,同时通过MTT法得到骨髓基质干细胞的最佳生长代数。结果：将分离好的rMSCs细胞在不同时进行观察,可以发现随着时间的延长,细胞的密度也在增加,并最终铺满整个底部。CD44在rMSCs中有较高表达,而CD34在rMSCs中没有表达。取P2, P3, P4,P5代细胞培养,用MTT法分别的其生长的第1-10天检测生长情况。细胞在第4代时的生长情况最好,明显优于其它三代细胞。结论：从兔身上得到了骨髓基质干细胞,并得到其最佳的生长代数,为进一步研究奠定基础。第二部分 力生长因子通过PI3K/AKT途径促进rMSCs增殖及其向成骨细胞的分化目的：研究力生长因子(MGF)通过PI3K/AKT途径促进rMSCs增殖及其向成骨细胞的分化的机制。方法：通过MTT选出最佳的MGF浓度,进而用Western blot观察MGF对rMSCs中PI3K/AKT通路的作用,同时用定量PCR和Westernblot观察rMSCs向成骨细胞分化的情况。结果：MGF受体在MSCs中表达量较多,MGF的浓度为45ng/ml时作用第五天的效果最好。在4小时时磷酸化的AKT和磷酸化的mTOR的表达量明显高于其他各个时间段。这表明MGF在作用四小时时的效果最佳。成骨细胞中的标准蛋白ALP和OCN在mRNA和蛋白水平的表达量在四小时最高。结论：MGF通过AKT促进rMSCs增长,及向成骨细胞的分化。第三部分 PI3K/AKT磷酸化抑制剂LY294002对rMSCs增殖和分化的影响目的：为进一步研究PI3K/Akt在rMSCs中增殖作用,本研究用P13K/Akt磷酸化抑制剂作用于rMSCs,研究其对细胞的影响。方法：用PI3K/Akt磷酸化抑制剂LY294002作用于rMSC s,用MTT法选择最佳的作用浓度,用Western blot检测LY294002磷酸化的AKT和磷酸化的mTOR的表达情况,用MTT检测]Y294002对MSCs生长的影响,然后用western blot检测检测ALP和OCN的表达量。结果：20 υ mol/L的LY294002作用已经较为明显。对磷酸化的AKT和磷酸化的mTOR的表达量明显降低。对rMSCs生长有抑制作用。而对ALP和OCN的表达量明显降低。结论：MGF对促进rMSCs的增长作用,是通过PI3k/AKT通路。