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石花菜(Gelidium amansii)属于红藻门,真红藻亚纲,石花菜属。藻体多呈现红色,广泛分布在沿海地区。石花菜是提取琼胶的一种重要原料,广泛应用于医药和食品行业。石花菜味甘咸,凉性特质,具有降压、降脂和抗凝血等作用,其提取物在抗氧化、抗炎症等方面表现出良好的活性。近年来,石花菜作为一种海藻多糖具有多种生物活性,倍受各领域研究者的关注,然而针对石花菜多糖的研究尚需完善。本文针对石花菜多糖的提取工艺、分离纯化、理化指标、结构表征及生物活性做了相关研究与分析。主要内容如下:1、石花菜多糖的提取工艺参数研究目前,多糖提取的方法多种多样,最为常见的有热水提取法、超声提取法。提取过程的时间、温度、液料比、重复次数是影响石花菜多糖提取的四个主要因素。首先针对这些主要因素进行单因素实验。然后选取三个显著影响因素(提取温度、提取时间、液料比),采用Box-Behnken实验设计法,进行3因素3水平响应面优化实验,通过Design-Experts 8.0.6软件进行统计分析,得到石花菜多糖提取过程的最优条件为:提取温度62.11℃,提取时间为1.6h,料液比为35.55mL/g。按照该提取条件,得到的多糖得率为4.17%。2、石花菜多糖的分离纯化、理化性质和结构分析本实验采用阴离子交换柱层析法对石花菜粗多糖进行纯化,得到四个主要纯化组分(GAP-1,GAP-2,GAP-3和GAP-4)。在常用检测方法的基础上稍作修改对石花菜粗多糖(Crude GAP)及其纯化组分进行测定。结果显示,Crude GAP、GAP-1、GAP-2、GAP-3、GAP-4 的总糖含量分别为 62.64±0.03%、67.16±0.01%、64.90±0.04%、58.32±0.02%和 47.30±0.04%。蛋白质含量分别为 3.36±0.02%、1.54±0.01%、0.99±0.01%、1.73±0.02%和 2.02±0.01%。糖醛酸含量分别为 4.29±0.41%、2.88±0.30%、4.67±1.0%、4.98±0.38%和 6.87±0.73%。硫酸基含量分别为 2.29±0.04%、1.29±0.11%、2.02±0.05%、3.46±0.37%和3.65±0.12%。总酚含量均低于0.5%,忽略不计。采用高效液相色谱法对石花菜多糖的单糖组成进行研究。结果分析可得石花菜粗多糖(Crude GAP)中单糖组成摩尔比为 Rib:Rha:Glc:Gal:Fuc=0.12:0.78:0.24:22.58:4.56;GAP-1 中 Gal:Fuc=8.72:10.62;GAP-2 中为 Gal;GAP-3 中 GlcA:Gal=0.17:13.24;GAP-4中 GlcA:Gal=3.02:23.61。石花菜多糖的分子量通过高效液相色谱法测定,结果表明GAP-1、GAP-2、GAP-3、GAP-4四个组分的分子量分别为1593 kDa、789 kDa、1225 kDa、1217 kDa,各个组分的多糖成分均一。3、石花菜多糖的体外模拟消化实验通过体外模拟唾液、胃液及胃肠液消化实验研究石花菜粗多糖的消化情况。结果表明,石花菜粗多糖经唾液、模拟胃液及肠液消化后,其分子量及还原糖含量均无明显变化,也没有检测到游离单糖,表明石花菜多糖在唾液、胃液及肠液中均未被消化。4、石花菜多糖的抗氧化活性与体外免疫调节活性通过DPPH自由基、ABTS自由基的清除力、金属离子螯合力、还原力、抑制脂质过氧化能力等化学方法对石花菜粗多糖(Crude GAP)及两种主要的分离纯化组分(GAP-2、GAP-3)进行抗氧化活性的研究。结果显示,石花菜粗多糖(Crude GAP)及两个纯化组分(GAP-2、GAP-3)清除DPPH、ABTS自由基能力和螯合金属离子的能力较弱,能够显著地清除超氧阴离子自由基,具有较强的抑制脂质过氧化能力。石花菜粗多糖(Crude GAP)及分离组分(GAP-2、GAP-3)的体外免疫活性采用体外细胞模型分析。结果表明,石花菜粗多糖(Crude GAP)及纯化组分(GAP-2、GAP-3)能有效促进小鼠巨噬细胞RAW264.7的增殖,提高RAW264.7吞噬中性红的能力及酸性磷酸酶活性,同时可以有效促使RAW264.7细胞释放NO。