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目的:研究荔枝核总黄酮(Total Flavonoids of Litchi Chinensis Sonn,TFL)对转化生长因子-β1(Transforming Growth Factor beta-1,TGF-β1)诱导的大鼠肝星状细胞T6(Hepatic Stellate Cell-T6,HSC-T6)细胞增殖及对细胞内核转录因子-κB(Nuclear Factor-kappa B,NF-κB)及α-平滑肌肌动蛋白(α-Smooth Muscle Actin,α-SMA)表达的影响。方法:用含10%FBS的DMEM培养液培养大鼠肝星状细胞T6,当细胞处于生长对数期,0.25%胰蛋白酶消化收集细胞后,除正常组用含10%FBS的DMEM培养液外,其余组均用含10%FBS的DMEM+5μg/L TGF-β1培养液吹打均匀,配成单细胞悬液,行细胞计数。(1)MTT法检测细胞增殖活力。将细胞接种于96孔培养板中,培养12h后,按以下分组处理细胞,即TGF-β1组(含5μg/L TGF-β1,下同),对照组(含5‰DMSO,下同),TFL80、160、320、640、800组(即80、160、320、640、800 mg/L TFL),每组设5个复孔。分别于加药24、48、72 h后,按MTT法实验步骤准备细胞,采用酶标仪分别测定490 nm处各孔吸光度(A)值并分别计算细胞抑制率及半数抑制质量浓度(IC50),以确定后续实验的药物浓度组及药物作用时间。(2)Hoechst33258荧光染色观察细胞凋亡形态学变化。(3)采用半定量PCR法检测HSC-T6细胞中α-SMA、NF-κB mRNA的表达。将细胞接种于10 cm培养皿中,培养12h后,根据mtt法实验结果,重新分组处理细胞,即tgf-β1组,对照组,tfl125、250、500组(即125、250、500mg/ltfl组)。分组培养48h后,收集各组细胞,分别提取各组细胞总rna。用半定量pcr法检测各组细胞中nf-κb、α-smamrna的表达。(4)westernblot检测hsc-t6细胞中nf-κb及α-sma蛋白的表达。将细胞接种于10cm培养皿中,培养12h后,按步骤(2)分组处理细胞。分组培养48h后,收集各组细胞,分别提取各组细胞总蛋白。用westernblot法检测各组细胞中nf-κb、α-sma蛋白的表达。结果:(1)mtt检测结果显示,在同一作用时间点,随着tfl浓度的增高,hsc-t6细胞的a值逐渐降低,相反细胞抑制率则逐渐上升。(2)荧光显微镜下观察显示:对照组细胞胞核完整,tfl250组细胞见凋亡细胞核及核碎片。(3)半定量pcr法检测结果显示,tgf-β1组hsc-t6细胞nf-κbmrna(0.55±0.04)、α-smamrna(0.36±0.05)表达量与对照组hsc-t6细胞nf-κbmrna(0.58±0.06)、α-smamrna(0.41±0.03)表达量差异无统计学意义(p>0.05);tfl125组hsc-t6细胞nf-κbmrna(0.53±0.03)、α-smamrna(0.35±0.06)表达量与tgf-β1组、对照组差异均无统计学意义(p>0.05);tfl250组hsc-t6细胞nf-κbmrna(0.23±0.01)、α-smamrna(0.22±0.02)表达量及tfl500组hsc-t6细胞nf-κbmrna(0.14±0.01)、α-smamrna(0.18±0.02)表达量均分别与对照组的nf-κbmrna、α-smamrna有统计学差异(p<0.05)。(4)westernblot法检测各组细胞中蛋白分析显示,tfl250组hsc-t6细胞nf-κb蛋白(0.28±0.07)、α-sma蛋白(0.38±0.01)表达量及tfl500组hsc-t6细胞nf-κb蛋白(0.19±0.01)、α-sma蛋白(0.33±0.13)表达量均分别与对照组的NF-κB蛋白(0.46±0.06)、α-SMA蛋白(0.64±0.13)有统计学差异(P<0.05)。结论:TFL可抑制活化的HSC-T6细胞增殖及诱导其凋亡,同时可抑制NF-κB、α-SMA因子的表达。其机制可能是TFL通过抑制活化的HSC-T6中NF-κB表达,以抑制细胞的增殖及促进凋亡,从而发挥其抗肝纤维化作用。