水稻草矮病毒(Rice grassy stunt virus，RGSV)为纤细病毒属(Tenuivirus)的一个成员，在生物学性质及基因组结构等方面具有许多特性，是研究病毒与寄主互作机制的理想材料。RGSV含有6个单链RNA(singal strand RNA，ssRNA)片段，均采用双义编码策略，这在植物病毒中是很独特的。该病毒的全基因组核苷酸序列已经测定，但对基因及其编码蛋白的功能还知之甚少。 SP(disease specific protein，SP)是由水稻草矮病毒RNA6正义链编码的一种病害特异蛋白，该蛋白在寄主体内大量积累，但在带毒昆虫体内的表达量很低，这说明该蛋白在病毒与寄主的互作中可能起着重要作用。本文通过转基因技术，将RGSV SP基因转入水稻中，以期为研究该基因在病毒与寄主基因的互作及其与病毒致病性的关系奠定基础；并通过病毒侵染原生质体技术，来检测SP基因在寄主体内的转录和表达情况。 由张春嵋博士提供的植物表达载体，通过与动员质粒PRK2013和农杆菌LBA4404进行三亲交配，将目的基因导入农杆菌中。分别利用未成熟胚、经分裂扩繁的幼胚和成熟胚作为受体材料，进行愈伤组织诱导。这些受体材料与含目的基因的农杆菌进行共培养后，在有选择压力的条件下进行筛选、分化，最后再生获得转基因植株。分别经PCR和Southern点杂交分析，结果表明目的基因已整合到水稻基因组中。RT-PCR-Southern点杂交结果表明目的基因已在植株体内进行了转录。对再生植株的初步观察没有发现与病毒侵染类似的症状。 为了进一步研究SP基因在寄主体内的表达周期，我们建立了水稻原生质体培养体系，用聚赖氨酸介导的方法将提纯的RGSV接种到水稻原生质体内，并利用地高辛标记制备的核酸探针，按不同时间取样，进行Northern点杂交实验。结果表明：接种8h后能检测到mRNA的积累，在24-32h达到最大值，随后慢慢下降，但仍有表达。利用SP抗血清进行Dot-ELISA检测结果表明：SP在12h开始表达，32h达到最高值，随后逐渐降低。