基于核酸适配体的赭曲霉素A和伏马毒素B1检测方法研究

来源 :浙江农林大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:weedppp
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
霉菌毒素是由真菌产生的一种具有毒性的代谢产物。赭曲霉毒素A(OTA)是存在于谷物、饲料等农产品中的一种霉菌毒素,而伏马毒素B1(FB1)是主要存在于玉米及玉米制品中的一种致癌物。因此,霉菌毒素精准检测技术的开发对于保障食品安全至关重要。为此本文基于特异性核酸适配体建立OTA和FB1的检测方法。  核酸适配体是一种特异性识别靶分子的单链寡核苷酸(RNA或 DNA),具有较强的亲和力。PicoGreen是一种可以定量检测双链DNA且不受单链DNA影响的荧光染料,在激发波长480 nm处有最大荧光。为了开发针对霉菌毒素的快速检测技术,本研究利用核酸适配体及PicoGreen染料的特点,建立了一种基于核酸适配体快速检测赭曲霉毒素A和检测伏马毒素B1的方法。  结果表明本研究建立的PicoGreen/适配体方法的最优反应缓冲体系为:10 mmol/L Tris,120 mmol/L NaCl,5 mmol/L KCl,20 mmol/L CaCl2(pH8.5)。本研究使用的OTA核酸适配体序列为:5-GATCGGGTGTGGGTGGCGTAAAGGGAGCATCGGACA A-3。该核酸适配体与 OTA结合后,未结合的核酸适配体与互补链杂交生成双链DNA,PicoGreen与双链DNA反应3 min后激发产生的荧光达到峰值(激发波长为480 nm,发射波长为520 nm)。该方法检测赭曲霉毒素A的灵敏度为:1μg/L;检测范围为:1μg/L?200μg/L。OTA核酸适配体与黄曲霉毒素B1、伏马毒素、桔毒素和玉米赤霉烯酮等霉菌毒素无交叉反应。本方法与基于抗体的ELISA方法符合(Kappa值为:0.885)。  本研究利用FB1核酸适配体和PicoGreen建立检测FB1的方法,最低检测限为0.1μg/L,线性范围为0.1μg/L?1μg/L。整个检测流程可在45min内完成。特异性试验表明,适配体方法特异性强,与靶标霉菌毒素以外的常见霉菌毒素无交叉反应。结果表明适配体方法与商品化的基于抗体的ELISA方法非常符合(Kappa值0.857)。  由于核酸适配体比抗体成本低,检测时间短,本研究建立的基于核酸适配体的方法比ELISA方法更具有市场竞争性和推广应用价值。
其他文献
初中语文名著导读梯度性设计是初中语文教学的重要组成部分,对于初中语文教学具有重要意义.初中语文名著导读梯度性设计不仅能帮助学生发展阅读知识,还能帮助学生提高语文素
祖国的传统文化博大精深,在中华民族五千年的历史长河中源远流长,是现代文化的基石;是我们民族宝贵的精神财富,她守护着中华儿女共同的精神家园,凝聚着自强不息的民族精神.小
小麦面粉的烘烤品质与高分子量谷蛋白亚基(HMW-GS)的组成密切相关。烘烤品质的常规测定方法通常需要昂贵的设备和较大的样品量。从20世纪80年代开始,免疫学方法逐渐应用于小麦
本文通过对荣华二采区10
期刊
羟基卤化铜Cu2(OH)3X(X=Cl,Br,I)已经被证明在低温下具有奇异的量子磁学特性(磁几何阻挫特性)和结构特性,因而得到广泛关注和研究。但是,人们很少利用红外光谱学和拉曼光谱学手段研究它们的磁学特性和结构特性。最近,我们成功地利用低温拉曼光谱学方法,研究了 γ-Cu2(OH)3C1的量子磁学特性,而国外研究组也利用了我们的数据分析了其结构特性。近二十年前(1999年),具有与Cu2(OH)
光纤陀螺仪作为制导系统和导航方面的关键性部件,是一种极其重要的惯性传感器。慢光光纤陀螺是在传统光纤陀螺的基础上引入慢光,不仅大大减少了光纤所需的长度,而且提高了陀螺仪