慢性乙型病毒性肝炎是严重危害人类健康的传染病，全世界约3亿人感染乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)，占世界人口的5％，年均感染率约为5千万人。我国是HBV感染高发区，HBV携带者达1亿人，约占我国人口10％。HBV感染者中，约5％～10％成人和80％～90％儿童感染者不能清除病毒，发展成为慢性乙肝患者或携带者，其中约5％～20％慢性感染者最后发展为肝硬化或肝细胞癌。对慢性乙型病毒性肝炎的治疗和预防一直是世界性难题，以IFN-α和拉米芙定为主的药物治疗能抑制病毒复制，但有效应答率低、疗程长、费用高，治疗效果并不令人满意，且存在停药后的反跳和长期用药带来的抗药性及病毒变异等问题，一般认为，疫苗接种是预防和治疗慢性乙肝最安全有效而且价廉的措施。 自1997年世界卫生组织(WHO)推荐实施乙肝疫苗计划免疫以来，大范围的疫苗接种有效降低了HBV感染率，为预防慢性乙肝做出了突出贡献，但只含S抗原的基因工程疫苗的不应答或低应答率高达10％～15％，且不能诱导有效的细胞免疫应答，不能诱导慢性HBV感染者或携带者产生保护性应答，因此，其治疗性意义不大。慢性乙肝感染者或携带者是HBV感染重要传染源，对慢性乙肝患者或携带者的有效治疗，对控制疾病发展和预防HBV传播均有十分重要的意义。提高疫苗应答率及研制治疗性疫苗是新一代乙肝疫苗研究的热点之一。 基因免疫可诱导强烈的细胞和体液免疫应答，在治疗性疫苗研究中占有重要地位。本研究在对HBV表位研究基础上设计、合成了HBV多CTL表位串联的复合基因，并利用基因工程技术将其取代HBc脊区基因，杂合HBc基因克隆于质粒pcDNA3.1后，经PCR、限制性酶切分析和DNA序列测定等方法筛选和鉴定重组克隆。阳性重组质粒以脂质体介导转染哺乳动物细胞NS一1，并以RT一PCR、队ISA、工FA及western一blot对其表达产物进行鉴定，探讨杂合HBc基因在真核细胞内的表达情况并筛选稳定表达的重组细胞株。该嵌合基因经肌肉注射免疫BALB/C小鼠，分别用ELISA及cELISA检测其诱导的抗体水平及波动情况，以流式细胞术检测疫苗免疫后的CD4/CDS比值变化及用LDH释放法检测疫苗诱导的特异性CTL活性变化，研究其诱导的体液和细胞免疫应答。 结果显示，经序列测定证实，克隆的HBC编码序列与HBV adr株基因同源性超过99%，且氨基酸序列完全一致，且多表位基因BPT成功克隆至HBc脊区基因位点，其基因序列和氨基酸序列均与设计序列完全一致。杂合HBc基因全长885bp，编码292个氨基酸。体外转染实验表明，转染嵌合基因HBeMep的重组细胞经RT一PCR、ELISA、IFA及Western一blot等实验证实正确表达目的蛋白，目的蛋白相对分子量约33KDa，与预测分子量一致。重组质粒pHBcMep免疫BALB/c小鼠后，能激发明显的抗体应答(p<0 .05)和回忆反应，最高抗pre一S2滴度为1:800(ELISA)，抗HBeMep滴度为1:1000一1500(eELISA)。细胞免疫指标显示CD4/CDS比值增高(p<0 .05)且CTL活性明显增强。在免疫后第4周，特异性CTL活性超过16LU3。(E:T 6.25:l时，特异性CTL杀伤率为39.170，0士1.50，0)，且在免疫后第4月，仍保持较高活性CTL应答。 实验表明，嵌合基因HBcM即免疫能迅速激发较强的体液和细胞免疫应答，并维持较长时间。病毒特异性细胞免疫应答可对抑制病毒复制和清除病毒产生积极的作用，实验为进一步研究各表位特异性免疫应答及该嵌合基因免疫的预防和治疗作用奠定了基础。