【摘 要】
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甘草不仅是我国传统中药,同时也是药食同源的物质之一,含有多种生物活性成分成,黄酮类化合物是其主要生物活性成分之一,具有降血糖、抗炎抑菌、抗氧化、抗肿瘤等多种药理活性,在医药、保健、食品等行业具有巨大的应用前景。由于野生甘草资源的匮乏,因此亟须找到一种高效、快速的甘草总黄酮提取纯化方法,保护甘草野生资源,提高甘草资源的利用效率。以往人们对甘草的研究多集中于黄酮的提取工艺,对其质量评价也仅以甘草苷、甘
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甘草不仅是我国传统中药,同时也是药食同源的物质之一,含有多种生物活性成分成,黄酮类化合物是其主要生物活性成分之一,具有降血糖、抗炎抑菌、抗氧化、抗肿瘤等多种药理活性,在医药、保健、食品等行业具有巨大的应用前景。由于野生甘草资源的匮乏,因此亟须找到一种高效、快速的甘草总黄酮提取纯化方法,保护甘草野生资源,提高甘草资源的利用效率。以往人们对甘草的研究多集中于黄酮的提取工艺,对其质量评价也仅以甘草苷、甘草酸为标准,难以全面的评价甘草质量。因此本课题对甘草总黄酮的纯化工艺进行研究,并对纯化物中其标志性化合物进行含量测定,最后采用酶促反应动力学法探讨甘草总黄酮纯化物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用进行研究,以期为甘草总黄酮降血糖活性的进一步研究提供一定的理论依据,也为甘草资源的进一步利用提供参考依据。主要研究结果如下:（1）甘草总黄酮纯化工艺的研究。通过对五种不同大孔吸附树脂的比较,筛选出最佳大孔树脂,并在此基础上对甘草总黄酮的纯化工艺进行研究。得到最佳纯化工艺为:最佳大孔树脂为DM301大孔树,最佳纯化工艺条件为上样液浓度1.85 mg/m L、洗脱剂为体积分数50%乙醇、上样液体积100 m L、洗脱剂体积160 m L。在此条件下,经大孔树脂纯化后所得纯化物中总黄酮纯度达到45.20±1.06%,得到纯化后的总黄酮纯度是纯化之前的4.05倍。（2）建立同时测定甘草总黄酮纯化物中4种黄酮类化合物的高效液相色谱法。采用高效液相色谱法,通过对流动性体系、流速、柱温条件的考察,采用梯度洗脱,对甘草黄酮纯化物中4种标志性化合物（甘草苷、甘草素、异甘草素、甘草查尔酮A）的含量进行测定。方法学考察结果表明,甘草苷、甘草素、异甘草素、甘草查尔酮A在测定范围内具有良好的线性相关性,线性相关系数均在0.9993以上,回收率均在96%以上。结果表明该方法操作简便快速,精密度高且稳定性良好,可用于评价甘草药材的质量。利用所建立方法对甘草总黄酮纯化样品进行含量测定,4种化合物的平均含量分别为58.40 mg、72.46 mg、15.98 mg和10.62 mg。（3）采用酶促反应动力学方法研究甘草总黄酮纯化物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用。以甘草总黄酮纯化物为原料,以阿卡波糖为阳性对照,4-硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷（PNPG）为底物,对其进行酶促动力学研究。结果表明,甘草黄酮纯化物对α-葡萄糖苷酶具有一定的抑制作用,且随着纯化物浓度的增加抑制率也逐渐增大,甘草总黄酮纯化物对α-葡萄糖苷酶的抑制率为76.43±1.43%,IC50为0.040 mg/m L,甘草黄酮纯化物对α-葡萄糖苷酶的抑制类型属于可逆反竞争性抑制,将为甘草总黄酮纯化物的α-葡萄糖苷酶抑制剂药用开发提供依据。
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