乳腺生物反应器的构建关键在选择适宜的启动子和目的基因，才能保证目的基因在动物乳腺细胞中的高效、特异性表达，根据这要求选用的启动子一般是动物乳蛋白基因。酪蛋白是哺乳动物乳汁中主要的蛋白质，广泛地存在于反刍类和啮齿类动物的乳汁中，其中β-酪蛋白是一种高效表达的乳蛋白，是乳汁中含量较高的乳蛋白之一。在小鼠乳汁约占总蛋白的20％，在奶牛乳汁约占总蛋白的27％，在其它哺乳动物的乳汁中也占20～30％。在泌乳激素的刺激下，β-酪蛋白具有很强的表达活性，因此其调控成分能够指导靶基因在乳腺组织中高效表达。 为了构建动物乳腺表达载体，分别以荷斯坦奶牛β-酪蛋白和近交系C57/B6小鼠β-酪蛋白基因作为启动子；以中国人血小板生成素作为目的基因。将牛β-酪蛋白、小鼠β-酪蛋白和人血小板生成素与T载体(pMD-19载体)连接，用α互补蓝-白斑筛选法进行阳性筛选，将阳性菌液测序结果表明其同源性与NCBI里公布的序列达94％以上，保证下一步试验操作的准确性。利用限制内切酶将牛β-酪蛋白、小鼠β-酪蛋白和人血小板生成素从T载体切出，利用琼脂糖凝胶回收试剂盒回收、纯化；酶切载体pcDNA3.1(+)与之有相同的酶切位点，然后利用T4 DNA连接酶连接，用PCR和酶切鉴定，最终将启动子(牛β-酪蛋白和小鼠β-酪蛋白)、目的基因(人血小板生成素)与载体pcDNA3.1(+)连接，构建高效、特异性表达载体，为下一步目的基因的表达提供准备条件。试验结果如下： 1.克隆了约7.8Kb牛β-酪蛋白和约4.8Kb小鼠β-酪蛋白，分别作为启动子；克隆了约6.1Kb人血小板生成素，作为目的基因构建乳腺特异表达载体。 2.测序结果表明，克隆序列与NCBI里公布的序列其同源性在94％以上，可以进行下一步试验操作。 3.利用限制内切酶将目的基因从T载体中切出，用T4 DNA连接酶将目的基因与载体pcDNA3.1(+)连接，以备构建特异性表达载体。