【摘 要】
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自1999年Nicholson及其同事在核磁共振(NMR)研究的基础上提出代谢组学概念以来,基于NMR代谢组学得到了迅速地发展。目前基于NMR代谢组学的主要研究对象是体液样品的NMR谱。由
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自1999年Nicholson及其同事在核磁共振(NMR)研究的基础上提出代谢组学概念以来,基于NMR代谢组学得到了迅速地发展。目前基于NMR代谢组学的主要研究对象是体液样品的NMR谱。由于生物体液的储存、样品制备和实验条件都会对实验结果产生影响,因此研究样品制备、储存及实验条件可以了解外界条件对样品的具体作用效果,从而通过控制外界环境及人为操作,以保证试验数据的稳定性和可比较性。本文以基于NMR代谢组学试验中的人体的尿液、血液和全唾液为主要研究对象,研究各类样品的储存、制备和制取NMR谱图实验参数对NMR实验的影响,结合模式识别分析方法,得到适宜用于高通量试验的较合理参数。主要内容及结论如下:1.研究了实验条件对人体尿液样品NMR谱图的影响。随着实验温度变化,醋酸、甜菜碱及组氨酸的谱峰漂移明显,为此实验时应稳定样品温度。NOEPR序列中预饱和功率越高,对水峰附近的共振峰压制越大,受影响范围也越大,应根据需要选择适合的功率。尿液样品适宜用外标法进行实验。2.研究了实验条件对人体血液样品NMR谱图的影响。人体血液样品中的缬氨酸、维生素B族及低密度脂蛋白信号强度随实验温度升高而增强,实验时应稳定温度。血液样品因信号强度较弱,适宜内标法实验。3.研究了人体唾液样品储存与制备条件对NMR谱图的影响。实验结果表明4℃储存不利于唾液样品稳定,若须长期储存应选择低于25℃环境;NaF能在短期起到防腐作用,但不适用于长期储存;磷酸盐缓冲液浓度对唾液中的酸性物质的化学位移影响较大,建议使用较高浓度的缓冲液以稳定样品的pH值,从而保证实验数据的准确。
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