cvclin B又称细胞周期蛋白B，在G2期或G2/M转变期发挥着重要的作用。调节亚基cyclin B和催化亚基P34cdc2结合，组成M期促进因子MPF(M phase promoting factor)，又称成熟促进因子(maturation promoting factor)，为物种间高度保守的启动细胞由G2期进入M期的一个非常重要的蛋白激酶。在卵母细胞减数分裂成熟过程中起中心调控作用。在哺乳类和鱼类中研究发现MPF激活主要依赖于cclin B蛋白合成及P34cdc2的142Thr(苏氨酸)和152Tyr(酩氨酸)位点发生去磷酸化。在此过程中细胞周期蛋白B及其相关调控蛋白 Mos，mytl，和plxl，cdc25蛋白起了关键性的作用。有关cyclin B的研究目前主要集中在人、鼠等哺乳动物以及爪蟾、海星和一些鱼类(如鲤鱼，鲶鱼，金鱼)。相比于其它类的卵生动物，甲壳类动物的卵母细胞成熟调控的研究却极少。 为了进一步在蛋白水平研究cyclin B在日本对虾卵母细胞成熟过程中的作用，我们拟构建cyclin B原核表达体系，并对其表达产物进行初步纯化。首先.根据已知的序列设计两条特异引物，摸索条件进行目的基因的PCR扩增。经琼脂糖电泳鉴定在1290bp处出现特异性扩增条带，片断大小与预期值相符，且无非特异性扩增带，可判断成功扩增出目的基因。接着将cyclin B片段连接到温度诱导表达质粒pBV220上，构建pBV220/cyclin B重组子，用菌落PCR和双酶切方法筛选阳性克隆，并DNA测序进行鉴定。经过限制性内切酶酶切鉴定及DNA测序证实pBV220/cyclin B序列与理论值基本一致，仅第105和110位的氨基酸的密码子有差异，我们测的第105位的密码子是GCA，第110位的密码子是CTT，而报道的是GCC和CTG，虽然密码子不同，可翻译过来却是相同的氨基酸，这样虽基因序列有所差异，但氨基酸序列却是完全一样的。最后把阳性重组子分别转入大肠杆菌表达宿主菌JM109、DH5a、BL21(DE3)中，温度诱导表达，选择表达相对高效的菌株。SDS-PAGE鉴定表达蛋白，结果显示在48kD处有特异性表达蛋白条带，选择表达效率相对较高的DH5a做为工程菌株，表达量约占全菌蛋白的43％，表达量浓度达到230mg/L。并用电洗脱法对表达蛋白进行初步纯化本次试验首次建立了日本对虾cyclin B的原核表达体系并成功表达，为日本对虾cyclin B蛋白功能的研究奠定了基础。