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高盐是限制作物生长、发育和产量的主要胁迫之一。当前,全球人口不断增加,20%的灌溉农业遭受盐胁迫,培育高抗盐的植物新品种,开发利用盐碱地,已经成为一个亟待解决的全球性问题。本实验从盐地碱蓬上提取总RNA,以该RNA为模板通过RT-PCR合成cDNA,设计目的基因PrxQ的PCR-up/PCR-dn引物后,用PCR法扩增PrxQ基因,该基因的表达产物是过氧还蛋白Q—新发现的抗氧化蛋白之一。为了后续实验方便,我们构建pBS-TⅡ-PrxQ载体,转化大肠杆菌DH5α,通过PCR和酶切验证后,我们将其送出测序,并进行序列比对,以确保下一步实验研究的准确性。基于研究PrxQ基因提高生物耐盐碱能力的程度,我们构建了酵母表达载体。用pPIC9k-PrxQ-up/pPIC9k-PrxQ-dn做引物,以pBS-TⅡ-PrxQ为模板,在PrxQ基因上添加酶切位点EcoRI和Not I。然后,我们运用质粒pPIC9k构建载体pPIC9k-PrxQ,经PCR和酶切验证后,用热激法转化毕氏酵母,利用毕氏酵母的表达系统研究PrxQ基因的功能。经过组氨酸缺陷筛选和菌落PCR检验后,在NaCl浓度分别为0mol/L,0.3mol/L,0.6 mol/L,0.9 mol/L,1.0 mol/L,1.2 mol/L,1.3mol/L,1.4mol/L的液体YPD培养基中进行筛选,挑选耐盐碱能力较强的阳性克隆与未转化菌株做对照,证实PrxQ基因能够提高了毕氏酵母约的耐盐碱性,约20%。但可能由于质粒pPIC9k比较大,9000bp左右,而目的基因PrxQ较小,650bp左右,其提高程度不太明显。