血小板糖萼蛋白的ELISA方法的建立与血小板活化因子对脑梗死患者筛选诊断的意义

来源 :苏州大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ztwpc2008
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背景:  1.酶联免疫吸附测定法(ELISA方法)是采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接,然后通过酶与底物产生颜色反应,用于定量测定。操作步骤如下:(1)将特异性抗体与固相载体连接,形成固相抗体。(2)加受检标本:使之与固相抗体接触反应一段时间,让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合,形成固相抗原复合物。(3)加酶标抗体:使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。(4)加底物:夹心式复合物中的酶催化底物成为有色产物。根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量。该法具有特异性强,且操作简便,灵敏度和重复性较好等优点。  2.脑血栓是缺血性脑血管病中最常见的一种.它是由于供应脑部的动脉内有血栓形成,造成动脉管腔狭窄或完全闭塞,使其供血区局部脑组织缺血、缺氧、坏死而引起的神经功能障碍。俗称中风,脑血栓形成原因是脑血管内的动脉粥样硬化斑块使得血管狭窄,表面粗糙不平,而后斑块破裂出血,激活体内的血液凝固系统形成血栓,血液凝固过程血小板释放多种因子。急性脑血栓形成的发病涉及三个因素:血管壁结构完整性破坏,止血、凝血、纤溶系统的失平衡和血流状态的改变,三种因素相互作用,共同构成血栓形成的基本条件。近些年来,通过对脑血栓形成发病机制的深入研究,发现很多分子标志物在血栓形成过程中发挥着的重要作用,且也能够反映上述三种因素在血栓形血栓前状态.并对血栓形成后不同阶段的干预提供依据。  目的:  1.建立血小板糖鄂蛋白ELISA方法,并且用于临床检测。  2. SGC,P选择素,GP1bɑ对脑梗死患者筛选和诊断的意义。  方法:  1.选用2株互不干扰的单克隆抗体,建立双抗夹心,及选用抗体AN51做包被抗体,选SZ-2做标记抗体,用biotin标记SZ-2。AN51包被在96板孔上,再加入脑梗死患者样本(含GC)与固相载体反应,然后再加入另一种biotin标记的抗体SZ-2,最后再与底物氧化还原反应而成颜色,测其35例脑梗死患者OD值。  2.用SZ-2抗体抗GP1bɑ再用流式检测35个脑血栓患者的GP1bɑ表达和用SZ-51抗体抗P选择素再用流式检测25个脑梗塞患者P选择素的表达。  结果:  1. SGcELISA测量范围0.15-5.25 ug/ml,灵敏度:50 ug/l,精密度:批内低、中、高值变异系数分别为8.25%、7.35%和3.99%(n=6),批间分别为9.55%、8.82%和5.48%(n=6);准确度:平均回收率为101.88%。35例脑梗死血清中的SGC浓度:健康对照组SGC浓度为2.04±0.46明显低于脑梗死患者的SGC浓度为;3.4±0.34ug/ml。两组间比较差异具有显著性(P<0.05)。  2.脑血栓组血小板 CD62P(12.6±1.9%)阳性百分率显著高于对照组(6.46±1.50%),脑血栓血小板GP1bɑ(13.8±2.7)%阳性百分率显著低于对照组(24.31±6.5%)。两组间比较差异具有显著性(P<0.05)。  结论:  1.建立血小板糖鄂蛋白ELISA方法  2. SGC,P选择素,GP1bɑ对脑梗死患者筛选和诊断的意义。
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