野生植物内生放线菌的筛选研究

来源 :西北农林科技大学 西北农林科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:nightwish110
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为了寻找具有内生习性的植病生防放线菌,本研究采集秦岭自然保护区14种野生植物分离内生放线菌,对获得菌株进行非寄主植物体内的定殖、离体皿内抑菌活性、发酵条件优化、生物学习性和温室防病促生等方面的系统研究,并对菌株SG2进行鉴定。从而为我们现有生防菌株的人工改良和新生防制剂的开发提供菌源。本研究从采集的14种野生植物中分离获得29株内生放线菌,其中石竹(Dianthus chinensis)和野大豆(Glycine soja)分离得内生放线菌较多。植物不同组织中以根部获得的内生放线菌最多,其次为叶部和茎部。不同培养基的分离效果有一定差异,不同方法处理样品后的分离效果也有差别,其中用S培养基分离得到的内生放线菌最多,不同处理方法中以组织块法获得的菌株数明显高于组织研磨得到的菌株数。通过在非寄主植物体内的定殖研究,进一步证实分离得到的放线菌均是植物内生放线菌,而且这些菌株能够在与宿主植物不同科、不同属的植物体内定殖能力。皿内抑菌活性测定,发现6株内生放线菌表现出较高的抑菌活性。其中,菌株SF20对灰葡萄孢的抑制率达到88.0%。菌株SG2的发酵滤液对番茄早疫病菌的抑菌圈直径达到35mm。菌株SG2的SNB发酵滤液与靶标菌的孢子悬浮液按照体积2:1比例混合,对灰葡萄孢、大丽轮枝菌、番茄早疫病菌、西瓜枯萎菌和番茄叶霉病菌孢子萌发抑制率均达100%。对菌株SG2的发酵条件进行优化,确定其最佳发酵条件为:以葡萄糖和黄豆粉为碳氮源,50mL·250mL-1的装液量,10%的接种量,初始pH7.0,在26℃条件下,培养7d。正交试验确定菌株SG2的最适水平为A2B1C1,即发酵时间为7d,发酵温度为26℃,接种量10%为最佳。生物学习性研究结果表明,6株内生放线菌对黄瓜、番茄和黄豆3种植物的发芽均有一定的影响。菌株SF4和菌株SF20的孢子悬浮,菌株SF19的发酵液可以促进3种植物的胚根、胚芽以及植株生长。菌株SF20和菌株SF4的发酵液还可以提高黄瓜和番茄叶片叶绿素含量。温室防病试验发现,菌株SG2发酵液对番茄早疫病的防效达到89.72%,SF20防效达到73.27%。菌株SF4菌悬液对黄瓜白粉病的防效较好达到89.61%,SF20防效达到78.08%。而且,发酵液的处理效果优于菌悬液处理效果。根据形态学特征、培养特征、生理生化特性和16SrDNA序列测定,综合分析确定内生放线菌SG2为灰褐类群(Griseofuscus),微白褐链霉菌(Streptomyces albidofuscus)。
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