立体定向注射鱼藤酮制备帕金森病大鼠模型的研究

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目的:探讨单侧双靶点立体定向注射鱼藤酮(rotenone)制备帕金森病大鼠模型的方法,并对模型的行为学和形态学进行观察评价。 方法:采用成年雌性Sprague-Dawley大鼠28只,随机分为实验组18只,对照组10只,应用大鼠立体定向仪将鱼藤酮用微量注射器注射于大鼠脑右侧黑质致密部(SNc)及中脑腹侧被盖区(VTA),注射点坐标参照包新民立体定向图谱。鱼藤酮浓度为4μg/μl,溶解于二甲基亚砜中,每点注射2μl,对照组大鼠每点注射二甲基亚砜2μl。于手术后第1、2、3周分别观察大鼠由阿朴吗啡(APO)诱导的旋转行为,并于第2周和第3周行为学检测结束后第2天分两批处死大鼠,灌注取脑,分离中脑石蜡包埋,连续冠状切片,片厚为5μm,采用免疫组织化学染色方法观察中脑黑质酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元的改变。 结果: 1.实验组大鼠死亡2只,共16只大鼠进入结果分析。至第2周共有13只大鼠阿朴吗啡诱导出偏侧旋转,占实验组总数的81.25%,而对照组均未诱导出旋转,二者差异明显。 2.第1周时,大鼠诱导后每分钟最高转速为17圈,最低为不足1圈,平均4.4±4.3圈/分钟,30分钟旋转圈数平均为106±103;第2周时数据为平均6.4±5.2圈/分钟,152±112圈/30分钟。两组均数比较无统计学差异。 3.第2周处死5只模型组大鼠,其余8只大鼠3周旋转数据分别为每分钟4.8±5.2、7.9±6.2、8.0±5.9圈,30分钟内旋转分别为111±127、180±128、189±126圈,分别进行组间比较无统计学差异。 4.第1、2、3周大鼠旋转运动的启动时间分别为8.4±5.1、9.5±6.3、6.5±3.6分钟。3组时间比较无统计学差异。持续时间分别为36.5±9.1、38.5±8.6、45.0±6.3分钟。3组时间比较无统计学差异。 5.光镜下计数可见模型组大鼠右侧(鱼藤酮注射侧)中脑黑质TH阳性神经元数目平均为37.3±22.4个,而左侧平均神经元数为78.3±21.9个,右侧较左侧明显减少。而对照组大鼠黑质平均神经元数右侧为58.9±18.3个,左侧为64.5±16.5个,两侧比较统计学无差异。模型组大鼠与对照组大鼠右侧TH阳性神经元数比较,模型组较对照组明显减少。模型组大鼠第2周时右侧平均神经元数为32.4±19.2个,第3周时右侧神经元数为44.6±25.8个,两时间点比较统计学无差异。 6.部分切片细胞较对侧数目减少趋势不明显,但可在该侧发现免疫组化染色呈现出明显淡染。在高倍镜下观察细胞形态可见正常侧神经细胞境界清楚,核浆对比明显,着色均匀,神经纤维走行连续。而鱼藤酮注射侧神经细胞境界模糊,核浆对比不明显,着色浅且不均匀,神经纤维走行稀疏甚至中断。 结论: 1.立体定向偏侧双靶点注射鱼藤酮可较为成功地制备出急性损伤帕金森病大鼠模型。阿朴吗啡注射可诱导出大鼠稳定的旋转。 2.形态学上观察发现注射侧黑质多巴胺(DA)能神经元数量有显著减少和形态上的异常。
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