论文部分内容阅读
[目 的]检测APTR甲基化状态和circUBXN7表达水平在乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus,HBV)相关肝衰竭(Liver failure,LF)患者、慢性乙型肝炎(Chronic hepatitis B,CHB)患者、HBV携带者和健康人中的差异,初步探究二者在慢性HBV感染者中的临床意义。[方 法]本研究共纳入了 165名受试者,其中HBV相关LF患者15例,CHB患者50例、HBV携带者50例,健康体检者50例,所有HBV感染者均为2019年2月至12月云南省某医院收治的患者。通过甲基化敏感的高分辨率熔解曲线(Methylation-sensitive high-resolution melting,MS-HRM)方法检测 APTR 基因的DNA甲基化程度;通过实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)方法检测 APTR、CDKN1 A/p21(Cyclin dependent kinase inhibitor 1 A)和 circUBXN7 的 mRNA 表达水平;采用相关性分析来探讨APTR甲基化状态和circUBXN7表达水平与临床指标之间的关系;采用受试者工作特性曲线下面积(Aera under the receiver operating characteristic curve,AUC)评估APTR甲基化程度及mRNA表达水平、circUBXN7的mRNA表达水平在HBV感染者中的诊断价值。[结 果]1.研究对象的临床资料比较:性别、年龄及乙肝病毒e抗原(Hepatitis e antigen,HBeAg)、白蛋白(Albumin,ALB)在各组间分布无统计学差异(P=0.923,P=0.210,P=0.215,P=0.309);乙肝表面抗原(Hepatitis B surface antigen,HBsAg)浓度、HBV-DNA 载量、总胆红素(Total bilirubin,TBIL)、谷丙转氨酶(Glutamic pyruvic transaminase,ALT)、谷草转氨酶(Glutamic oxaloacetic transaminase,AST)、碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)、谷氨酰转肽酶(Glutamyltranspeptidase,GGT)及甲胎蛋白(Alpha fetoprotein,AFP)在各组间存在统计学差异(P=0.002,P<0.001,P<0.001,P=0.007,P<0.001,P<0.001,P<0.001,P=0.003)。2.第一部分研究中CHB患者的APTR基因甲基化水平[12.12(9.36,31.25)]高于HBV 相关 LF 患者[9.33(6.00,22.87)]和健康人[8.92(7.82,11.61)],差异存在统计学意义(z 值=38.726,P=0.040;z 值=33.440,P=0.003)。3.CHB患者的APTR基因mRNA表达水平(2.38±1.41)低于HBV相关LF患者(4.50±2.05)、HBV 携带者(5.78±2.78)和健康人(5.70±2.66),差异存在统计学意义(t=4.484,P<0.001;t=7.724,P<0.001;t=7.808,P<0.001)。CHB患者的p21基因mRNA表达水平(1.75±0.93)低于HBV相关LF患者(3.19±1.78)、HBV携带者(2.33±1.30)和健康人(2.72±1.01),差异存在统计学意义(t=-4.107,P<0.001;t=-2.589,P=0.011;t=4.989,P<0.001);HBV 相关 LF 患者 p21 基因mRNA表达水平高于HBV携带者,差异具有统计学意义(t=2.000,P=0.016)。但在HBV感染者中APTR基因的mRNA表达与p21基因表达水平无相关性(r=0.059,P=0.532)。4.研究对象中的APTR基因甲基化水平与mRNA表达量呈负相关(r=-0.220、P=0.022)。HBV感染者中APTR基因的DNA甲基化水平与HBsAg浓度呈正相关(r=0.231,P=0.015),mRNA表达水平与HBsAg浓度呈负相关(r=-0.258,P=0.006);HBV感染者中APTR基因的DNA甲基化水平、mRNA表达水平与HBV-DNA载量、TBIL、ALT、AST、ALB、ALP、GGT 及 AFP 均无相关性(P均>0.05)。5.APTR基因DNA甲基化程度和mRNA表达水平对于区分不同临床类型HBV感染者均具有良好的诊断价值。相比而言,区分不同临床类型HBV感染者的APTR基因mRNA表达水平的AUC要高于DNA甲基化水平的AUC,两种标志物联合诊断的AUC也高于单独水平的AUC。6.第二部分研究中CHB患者的circUBXN7的mRNA表达水平(4.68±1.50)高于 HBV 相关 LF 患者(2.57±1.58)、HBV 携带者(2.93±1.44)和健康人(2.01±1.99),差异存在统计学意义(t=4.607,P<0.001;t=5.958,P<0.001;t=-9.856,P<0.001);HBV携带者的circUBXN7的mRNA表达水平高于健康人,差异具有统计学意义(t=-3.475,P=0.001)。HBV 感染者中 circUBXN7 的 mRNA 表达水平与 HBsAg浓度呈正相关(r=0.199,P=0.034),与 HBV-DNA 载量、TBIL、ALT、AST、ALB、ALP、GGT 及 AFP 均无相关性(P>0.05)。7.CircUBXN7的mRNA表达水平对于区分不同临床类型HBV感染者具有良好的诊断价值。[结 论]1.APTR基因DNA甲基化和mRNA的表达水平相关性分析呈负相关,提示APTR基因DNA的高甲基化状态可能是导致mRNA表达水平下调的原因。2.APTR和circUBXN7在慢性HBV感染者的外周血白细胞中存在差异表达,提示二者参与了 HBV感染相关肝病的发生发展过程,可为HBV感染的治疗和预防提供新的思路。3.APTR和circUBXN7在区分HBV相关LF患者、CHB患者、HBV携带者和健康人中均具有良好的诊断价值,提示APTR和circUBXN7可作为诊断不同临床类型HBV感染者的生物标记物。