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天然自身抗体（natural autoantibodies, NAA）是指在没有任何抗原主动免疫的情况下，正常机体存在的针对一种或多种自身抗原的抗体，是“生理性自身免疫”或“正常自身免疫”（normal autoimmunity）的主要组成部分。NAA普遍存在于正常人和多种动物体内，其所识别的自身抗原涉及众多机体成分。自身免疫作为一种机制，即存在于自身免疫性疾病，也存在于正常生理情况下，有生理性（physiological）与病理性（pathological）之分。NAA由胚系基因编码，具有IgG、IgM、IgA三种同种型。NAA通过独特型-抗独特型网络，构成免疫系统的重要组成部分，参与免疫自稳态的调节，具有非特异性防御、加速代谢产物清除、抗炎、肿瘤监视、运送小分子活性物质等多种功能。 天然抗角蛋白自身抗体（anti-keratin autoantibodies, AK auto Ab）是NAA家族的一员，广泛存在于人和多种动物体内，参与了皮肤的多种生理和病理过程。自上世纪70年代Krogh发现AK auto Ab以来，众多学者对其生物学特性、功能作用、生理及病理意义等方面进行了广泛地探索。本实验室自上世纪80年代起对AK auto Ab进行了深入研究，体外实验观察到亲和层析纯化的AK auto Ab对角质形成细胞的增殖有抑制作用，并可促进角质形成细胞凋亡，另外AK auto Ab还可以抑制IL-1β刺激下的体外培养的角质形成细胞产生IL—6、IL-8；在动物实验中，观察到不同血清AK auto Ab滴度的动物在发生皮肤冻伤、烫伤和接触性过敏性皮炎时其炎症反应强度、组织损伤以及修复过程有着明显的差异，正常滴度的AK auto Ab动物在发生上述病变时，损 第四军医大学硕士学位论文伤皮肤局部有AK auto Ah沉积，组织损伤轻，恢复快，对组织起着保护作用并有利于其修复；而当AK auto Ah滴度低下时组织损伤严重，恢复缓慢，说明AK auto Ah主动介入某些皮肤病的病理生理过程。李巍观察了短期应用 AK auto Ah对家兔接触性皮炎模型的影响，发现 AKauto Ah可以促进接触性皮炎的修复。显示了 AK auto Ah有良好的临床应用前景，但AK auto Ah长期应用对机体是否有毒副作用？是否产生AK auto Ah 的抗体并影响其疗效？AK auto Ah的作用机制如何？这些都有待进一步研究。 为了观察长期大量应用同种异体家兔 AK auto Ah什abbit ant广keratln autoant。bodies，rAK auto Ah）对家兔可能产生的影响，并进一步探讨将AK auto Ah作为一种治疗制剂加以开发利用的可能性，我们以亲和层析纯化的同种异体rAK auto Ah长期大量作用于家兔，观察rAK auto Ah抗独特型抗体的产生及对机体重要脏器的影响：另外，我们制备了家兔接触性皮炎模型，探索了问种异体rAK auto Ah影响家兔接触性皮炎模型的作用机制。 本研究自家兔皮肤提取角蛋白，与溪化氰活化的SePharose 4B偶联制备角蛋白亲合层析柱，提纯来源于家兔混合血清的 AK auto Ah。以肌注方式连续给药90天，以去除，AK an上o Ah 的家兔丙种球蛋白和生理盐水作为对照。ELISA（酶联免疫吸附方法）检测 rAK a。to Ah独恃型抗体的产生，并分析实验动物血常规、血液生化指标及重要脏器组织病理改变。独特型抗体产生后，制备家兔接触性皮炎模型，观察 rAK autoAh 对家兔接触性皮炎模型的治疗作用，并检测了血清细胞因子IL—6、IL一S 的滴度变化。结果：①从家兔表皮提取的角蛋白纯度较高，分子量在44—66．ZKD之间，包括至少7种组分，显示了家兔表皮角蛋白成分的复杂性：制备的家兔角蛋白亲和层析柱偶联量和偶联率都比较高：纯化的家兔混合血清rAK。ut。Ah含量高于正常人；②注射。AK。ut。Ah的家兔血清中可检测到抗 rAK auto Ah独特型抗体的产生，对照组则没有检测到；③家兔rAK auto Ah独特型抗体的产生对rAK auto Ah的治疗效果无明显影响；④长期应用同种异体 rAK auto Ah对家兔重要脏器无明显影响，经HE染色心、肝、肺、肾等器官镜下改变与对照组未见明显差异：用脏体比计算得到脏器系数，各组间亦未见明显差异：血常规和血液生化主要指标与对照组亦未见明显差异；⑤注射同种异 －4． 第四军医大学硕士学位论文体rAK auto Ah的家兔血清中细胞因子 IL—6、IL—8的滴度较低，对照组这两种细胞因子的滴度则较高。 我们首次采用家兔角蛋白亲合层析柱纯化家兔混合血清，并采用纯化的同种异体rAK auto Ah作用于家兔，提供了一种理想的研究AK autoAh 药效学的模型。我们制备的家兔角蛋白亲和层析拄无论偶联率还是偶联量都比较满意，获得的，AK auto Ahs纯度较高。本实验证明长期大量应用同种异体 rAK auto Ah对家兔无明显毒副作用，因为产生高剂量免疫耐受性，所以抗，AK auto Ah独特型抗体的产生并未显著影响 rAK auto Ah 的疗效，我们推测 rAK auto Ah 与其独特型抗体相互识别构成“网络”联系，在免疫调节中发挥某种作用，家兔重