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目的:祛痰活血方是我院孙同郊教授治疗非酒精性脂肪性肝病的经验方。前期研究表明祛痰活血方能显著改善痰瘀互结型非酒精性脂肪性肝炎,显著降低大鼠肝脏组织脂肪肝变程度,减轻肝脏炎症反应,调节肝脏脂质代谢,其作用机制尚不完全清楚。胰岛素抵抗是非酒精性脂肪性肝病发病的中心环节,利用非酒精性脂肪性肝病大鼠模型探讨祛痰活血方调节胰岛素重要信号转导通路IRS/PI3K/AKT/mTOR信号通路治疗非酒精性脂肪性肝病的机制,进一步明确祛痰活血方治疗非酒精性脂肪性肝病的分子机制,为名老中医的临床经验和学术思想传承提供实验依据。方法:1.分组、模型建立及给药(1)将30只SD大鼠适应性喂养1周后,用随机数字表随机分为正常组(10只)、造模组(20只);正常组喂养普通饲料,造模组高脂饲料喂养,各组大鼠正常活动及饮水。(2)造模时间为8周,8周后随机选取2只造模组大鼠处死,摘取大鼠肝左叶组织做石蜡切片苏木素-伊红(HE)染色,据肝脏病理检测结果及NAS积分判定是否达到模型标准,确认造模成功后,将剩余造模组(18只)再次随机分为模型组(9只),祛痰活血方组(9只)。(3)正常组继续给予普通饲料喂养,模型组及祛痰活血方组给予高脂饲料喂养。正常组、模型组予以生理盐水10 ml/(kg·d)灌胃,祛痰活血方组予以祛痰活血方浸膏11.7 g/(kg·d)灌胃,连续干预4周。2.标本采集与处理(1)干预第4周末,称大鼠体重,腹腔注射10%水合氯醛(3 mL/kg)麻醉,分离暴露腹主动脉,采血量约5 mL,静置4 h后,离心10 min取上层血清-80℃保存。(2)处死大鼠,摘取肝脏,称取质量。取肝左叶置中性福尔马林中固定,行HE染色;另取肝右叶约1.0cm×1.0cm×1.0cm大小行冰冻切片,行油红0染色;余肝脏放入冻存管中,-80℃保存。3.观察祛痰活血方对非酒精性脂肪性肝病大鼠相关血清生化指标的影响(1)试剂盒检测血清TG、TC、LDL-C、HDL-C、FBG含量。(2)ELISA法检测血清FINS、VLDL含量。(3)计算HOMA-IR。4.观察并探讨祛痰活血方对IRS/PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响应用Western blotting方法分析祛痰活血方对IRS/PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白的表达。5.观察祛痰活血方对非酒精性脂肪性肝病大鼠肝脏病理学改变的影响应用HE和油红O染色观察祛痰活血方对非酒精性脂肪性肝病大鼠肝脏病理学改变。结果:1.祛痰活血方能降低非酒精性脂肪性肝病大鼠体重及肝湿重。2.祛痰活血方能显著降低非酒精性脂肪性肝病大鼠TG、TC、LDL-C、VLDL,升高HDL-C,显著降低FBG、FINS、HOMA-IR,调节糖脂代谢,改善胰岛素抵抗。3.祛痰活血方能改善非酒精性脂肪性肝病大鼠肝脏脂质沉积和脂肪变程度。4.祛痰活血方能降低非酒精性脂肪性肝病大鼠模型肝脏组织中IRS-1、p-PI3K、p-AKT、mTORC1蛋白表达。结论:1.祛痰活血方可以改善NAFLD大鼠胰岛素抵抗,调节糖脂代谢,改善NAFLD大鼠肝脏脂肪变程度。2.祛痰活血方治疗NAFLD的作用机制可能是通过抑制IRS-PI3K-AKT-mTOR信号通路相关基因和蛋白的表达发挥作用