【摘 要】
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抗苗勒氏管激素（Anti-Mullerian hormone,AMH）是由雄性睾丸支持细胞和雌性卵巢颗粒细胞分泌的一种仅在性腺中表达的糖蛋白,是TGFβ超家族（Transforming growth factor beta superfamily,TGFβ超家族）配体成员。在雌性动物中,AMH由卵巢颗粒细胞分泌,作用原始卵泡,防止卵巢储备过早耗尽。AMH基因在哺乳动物中研究较多,在家禽方向研究甚少
【基金项目】
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国家财政部和农业农村部: 国家现代农业产业技术体系（CARS-42-2）黑番鸭新品种选育效果研究（2019QYPY-130）；
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抗苗勒氏管激素（Anti-Mullerian hormone,AMH）是由雄性睾丸支持细胞和雌性卵巢颗粒细胞分泌的一种仅在性腺中表达的糖蛋白,是TGFβ超家族（Transforming growth factor beta superfamily,TGFβ超家族）配体成员。在雌性动物中,AMH由卵巢颗粒细胞分泌,作用原始卵泡,防止卵巢储备过早耗尽。AMH基因在哺乳动物中研究较多,在家禽方向研究甚少。本研究通过构建黑羽番鸭AMH基因的真核表达载体,并将其转染到番鸭卵巢颗粒细胞中进行功能验证,对AMH基因的单核苷酸多态性与产蛋量和体重数据进行关联分析,结果如下:1.首先为了探究AMH在番鸭卵巢中的表达规律,本研究通过q RT-PCR（Quantitative Real-time PCR,q RT-PCR）的方法检测高低产番鸭卵巢中和不同等级卵泡中AMH及其受体AMHR2（Anti-Mullerian hormone receptor type 2,AMHR2）的表达情况。研究发现AMH/AMHR2在低产番鸭卵巢中表达显著高于高产番鸭。随着卵泡的发育,AMH表达量逐渐降低,AMH在大白卵泡中表达量最高,在等级卵泡中时AMH表达量降到最低水平。初步得出结论AMH在卵泡发育过程中起抑制作用。2.本试验成功克隆了黑羽番鸭AMH基因的CDS区序列,长度为1833 bp,编码610个氨基酸,是分泌蛋白,有三种二级结构,存在信号肽。构建了真核过表达载体,为深入研究AMH对番鸭颗粒细胞的作用奠定了基础。3.为了验证AMH在番鸭卵巢颗粒细胞中的功能,本试验用AMH过表达载体转染番鸭颗粒细胞。通过荧光定量方法检测AMH及其相关基因的表达情况,结果表明,AMH处理组与对照组相比,AMH的受体AMHR2、ALK2、ALK3、ALK6表达量显著增高,FSHR的表达量无显著差异,由此证明AMH可通过AMHR2、ALK2、ALK3、ALK6受体在颗粒细胞中发挥作用。凋亡相关基因Caspase-3,c-Myc和Bcl-2的表达无显著差异,增殖相关基因CDK2和PCNA的表达量在AMH处理组低于空白对照组,结果表明AMH抑制颗粒细胞增殖。4.为研究黑羽番鸭AMH基因的单核苷酸多态性与产蛋及体重性状之间的关系,本试验随机采取186只笼养黑羽番鸭,采用限制性内切酶（PCR-RLFP）的方法进行AMH基因SNPs筛选,并与产蛋和体重性状进行相关性分析。最终筛选了三个位点g.1731G>A、g.2044T>C、g.3531C>T,其中g.1731G>A的AG为优势基因型,相关性分析结果表明,g.1731G>A突变位点中AG基因型产蛋数显著高于AA型（P<0.05）,g.1731G>A与体重不显著相关（P>0.05）;g.2044T>C的CC为优势基因型,CC基因型的产蛋数显著高于TT型和TC型（P<0.05）,CC基因型的体重显著高于TT型（P<0.05）;g.3531C>T与产蛋数和体重不相关（P>0.05）。综上可知,本研究AMH基因的单核苷酸多态性对产蛋有影响,g.1731G>A和g.2044T>C可以为培育优良番鸭品种提供可参考的遗传标记。综上所述,本试验研究了AMH在高低产番鸭中的表达规律和不同等级卵泡中的表达规律;克隆黑羽番鸭AMH基因,成功构建AMH过表达载体。在细胞水平上对AMH进行功能验证,对AMH基因的多态性与生产性能进行关联分析。本研究揭示了AMH在番鸭颗粒细胞中的作用,为进一步研究提供理论基础,为培育优质番鸭品种,提供可参考的遗传标记。
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