苏云金芽胞杆菌菌株YBT-1765是从粮食仓库中分离得到的一株拟步行甲亚种(H<,8ab>)菌株。该菌株至少含有三个内生质粒，本文对其可检测到的最大质粒pBMB165的复制区和最小质粒pBMB175的研究结果如下： 1.质粒pBMB165复制子的研究克隆并分析了包含质粒pBMB165复制子的一个20kb的DNA片段(GenBank登录号为：DQ242517)。通过缺失实验，将质粒 pBMB165的复制子缩短到一个3.6kb的片段上。同时证明，质粒编码的复制蛋白 Rep165 和两个顺式作用因子(复制起点ori165 和重复子 iterons 区域)为质粒复制必需因子。还发现了两个重叠的开放阅读框：ORF6和ORF10，能参与控制质粒稳定性，为质粒稳定遗传必需因子。这是首例报道的来源于拟步行甲亚种质粒复制子。 通过序列分析，质粒pBMB165复制子与θ复制pAMβ1家族质粒的复制子具有同源性，该质粒也应属于pAMβ1质粒家族。此外，芽胞杆菌群中pAMβ1家族质粒(pBMB165，pBT9727，pAW63和pXO2)复制区之间还表现出结构组成的相似性，但是与其它细菌中的pAMβ1家族质粒复制子的结构组成不同，表现出该家族质粒复制子的遗传可变性。 另一方面，在质粒pBMB165复制子相邻区域含有五个可能的转座因子。其中，IS231U为一种新的IS231类插入序列；根据序列的相似性，ISBth165、ISBth166和ISBth167分别属于IS5、IS110和IS3家族转座因子；TnBMB165是一个不完整的Ⅱ型转座子。这些转座因子的存在，可能引起遗传物质的交换和重组，从而导致质粒或质粒复制子的进化，为研究pAMβ1质粒家族质粒及其复制子的进化提供了有用的遗传信息。 2.菌株YBT-1765消除质粒突变株的筛选将出发菌株YBT-1765采用逐级升温培养以及十二烷基磺酸钠(SDS)处理的方法，筛选得到两株质粒部分消除突变株，其中，突变株BMB193消除了YBT-1765中可检测的最大质粒pBMB165；突变株BMB175则只含有出发菌株中的最小质粒pBMB175。 3.质粒pBMB175的克隆和分析克隆得到菌株YBT-1765中大小为14，841bp的最小质粒pBMB175(GenBank 登录号为：DQ364061)。序列分析表明，pBMB175含有18个ORFs(大于70个氨基酸)。其中，8个ORFs(编码假定蛋白)与苏云金亚种滚环复制质粒pGI3的ORFs有不同程度的同源性。 通过缺失分析，将质粒pBMB175复制子定位在1，151bp的XbaI-ClaI片段上，该复制子只含有一个完整的ORF(ORF7)，且为复制所必需。数据库搜索表明，ORF7的编码产物与任何已知蛋白没有显著的序列相似性，从而推测，ORF7 可能编码一种新的复制蛋白。通过核苷酸序列二级结构分析，预测了 pBMB175 可能的双链复制起点(dso)区域，该质粒可能的dso区与其它滚环复制质粒的dso区没有同源关系。因此，pBMB175可能属于一类新的质粒家族。