论文部分内容阅读
研究背景：肺癌是目前世界发病率和死亡率最高的恶性肿瘤,严重威胁人类健康,据不完全统计,2008年,全球新发肺癌患者160多万,死亡140多万,且近年来,其发病率和死亡率呈逐年上升趋势。目前,所有肺癌患者的5年生存率在15%左右,但早期肺癌患者行根治性手术切除后5年生存率可达70%以上。所以,研究肺癌的生物学特性、找到能够早期发现肺癌的方法显得尤为重要,而肿瘤标志物的研究是近年来研究的一个热点。本实验室在前期的工作中建立了分析肺癌组织释放到体液中的游离蛋白的新模型,建立了包含1200多种蛋白的肺癌相关蛋白数据库,为肺癌肿瘤标志物的寻找提供了新的线索。本研究对其中的基质金属蛋白酶7(Matrix metalloproteinase7, MMP-7)在肺癌患者肿瘤组织中的表达和外周血血浆中的蛋白水平及其临床意义进行研究。材料和方法：①采用酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测214例外周血血浆样本(114例肺癌患者、100例正常对照)以测定其MMP-7蛋白的血浆浓度,检验其诊断肺癌的敏感性、特异性和准确度,并分析其浓度与肺癌患者的临床特征之间的关系。②对97例肺癌组织标本(来自上述114例肺癌患者石蜡包埋组织切片)进行免疫组织化学(Immunohistochemisty,IHC)染色,以分析MMP-7蛋白在肺癌组织和正常支气管、肺泡组织中的表达隋况及其与肺癌患者临床特征之间的关系。实验结果：①ELISA检测结果显示：肺癌患者外周血血浆中MMP-7蛋白浓度(n=114, Median=0.72ng/ml)显著高于正常人外周血血浆中MMP-7蛋白浓度(n=100,Median=0.30ng/ml, P<0.001),当cutoff值为0.56ng/ml时,MMP-7检测肺癌的敏感性为62.3%,特异性为76.0%；肺癌患者外周血血浆中MMP-7蛋白浓度与肺癌患者的年龄、性别、吸烟史、肿瘤大小、病理类型、肿瘤分化程度、淋巴结转移及分期比较均无统计学意义(P>0.05)；②免疫组化染色的结果显示：肺癌组织中MMP-7(62.91%)的蛋白表达明显高于正常支气管(10%)和肺泡组织(0%)(P<0.001),且肺癌组织中MMP-7蛋白表达与肺癌患者的肿瘤分化程度呈负相关,与淋巴结转移呈正相关(P值分别为0.025和0.017),与肺癌患者的其他临床特征无明显相关(P>0.05)。结论：(DMMP-7在肺癌患者外周血血浆中的蛋白水平和肿瘤组织中的表达均显著升高,提示MMP-7与其他MMPs家族成员一样,在肿瘤的生长、侵袭、转移中起重要作用,我们认为,MMP-7可能为肺癌的一种很好的肿瘤标志物,且因肺癌组织中MMP-7的蛋白表达与肿瘤的分化程度呈负相关,而与有无淋巴结转移呈正相关,所以,MMP-7可能成为预测肺癌患者预后的重要检测指标和将来新的肺癌靶向药物的靶标。②肺癌患者外周血血浆中MMP-7蛋白浓度与肺癌患者的临床特征之间无相关性,这一结论也证实了肿瘤标志物具有辅助诊断肿瘤作用,但与肿瘤患者的临床资料特征无明显相关性。研究背景：随着影像学技术的发展,目前临床上诊断的孤立性肺结节越来越多,但由于临床各诊断方法的局限性而影响了诊断的可靠性及诊断效率,绝大多数患者最终需手术切除,根据术中快速冰冻结果明确诊断和决定手术方案,但由于术中快速冰冻亦有一定的局限性,有时,并不能达到快速准确判断的目的。傅里叶变换红外光谱技术(Fourier Transform Infrared Spectroscopy, FTIR Spectroscopy)通过探测分子的构成和结构变化,可在疾病早期快速有效区分组织的良恶性。本研究旨在应用FTIR光谱技术扫描离体肺组织,通过建立判别方程式初步达到区分肺良恶性组织的目的。材料与方法：术中获取30例肺癌组织和30例正常肺组织标本,应用FTIR光谱仪并联合衰减全反射探头(Attenuated total reflection, ATR)对离体肺组织进行扫描。应用OMNIC软件(Thermo Nicolet, Boston)进行光谱获取。对获得的肺组织图谱应用Spapro2.2软件(北京大学化学与分子工程学院,北京)分析,测定参数包括组织图谱峰强、峰位、半峰宽,并计算峰强比值,1460cm-1是峰强中最稳定的谱带参数,因而使用此点的峰强进行相对峰强比值的计算。比较两组各参数,应用SPSS19.0软件进行数据分析,对正态分布数据行t检验,非正态分布行Mann-Whitney U检验,P<0.05为具有统计学差异。建立区分肺良、恶性组织的典则判别方程式。应用wilk lambda stepwise选择对判别方程式贡献最大的变量参数,并应用回顾验证和逐次剔除验证的方法衡量典则判别方程式的判别效力。计算敏感性和特异性,并将判别分类结果同病理金标准进行比较,检验此判别方程式的准确性。结果：在60个标本的光谱判别中,30例为恶性,另30例为非恶性。两组统计学比较中,峰位1640cm-1,1303cm-1,1120cm-1和1085cm-1有显著统计学差异；峰强1546cm-1,1460cm-1,1400cm-1,1165cm-1和1120cm-’有显著统计学差异；相对峰强比值1743/1460,1640/1460,1546/1460,1240/1460和1120/1460有显著统计学差异；半峰宽在1640cm-1,1460cm-1,1400cm-1,1303cm-1,1240cm-1,1165cm-1,1120cm-1,和1085cm-1处有显著统计学差异。典则判别方程式建立如下：Lmalignant=3.241X1+3.687X2+106.193X3+116.557X4-137.103=3.613X,+3.200X2+79.639X3+151.923X4-131.738X1表示1303cm-1处半峰宽； X2表示1240cm-1处半峰宽；X3表示1120cm-1处相对峰强比值；X4表示1546cm-1处峰强。ATR-FTIR光谱判别结果同病理金标准相比,其判别敏感性和特异性均为96.7%。结论：FTIR光谱技术联合典则判别统计学方法,可以达到快速而准确的鉴别良恶性肺组织的目的。