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近来的研究显示，革兰阴性菌中一种基因捕获和表达的遗传单位——整合子（integron）在细菌获得抗生素抗性机制中起了重要作用。整合子由整合酶（integrase）基因（intl）、整合酶特异性重组点attI和数目不定的基因盒（gene cassette）组成。基因盒往往由一个编码抗生素抗性的开放读码框（ORF）和一个整合位点attC组成。基因盒可从整合子中切除成为游离的环状分子，或者将外源基因盒捕获并整合入整合子。 近些年临床上分离的志贺菌对以往临床常用的抗生素逐渐耐药，有的菌株甚至多重耐药。以往研究表明，结合性质粒在志贺菌耐药性形成起了重要作用。新近数起研究报道了志贺菌中Ⅰ类和Ⅱ类整合子与菌株耐菌性关系。本研究对杭州地区近年分离的福氏和宋内氏志贺菌株进行Ⅰ类和Ⅱ类整合子的检测，了解其分布特征；进一步通过克隆测序和Southenblot，确定其携带的基因盒组成特征以及其在基因组中的位置；在研究中发现了一种缺少3’保守区的非典型Ⅰ类整合子，通过反转PCR了解此整合子的切除基因盒的特征；并对非典型Ⅰ类整合子和Ⅱ类整合子各自携带的aadA赋予宿主菌链霉素抗性的不同能力，进行了探讨。 本研究的64株宋内和福氏志贺菌中，63株分别于1998至2002年分离自杭州地区散发腹泻病人、暴发病人，1株分离自一起暴发事件的水源。 1．典型Ⅰ类整合子的分布及一级结构特征 典型的Ⅰ类整合子包括有5’保守片段（intI1）、可变基因盒区（引物inF～inB）和3’保守片段（引物qacEΔ1～sul1）。本文64株福氏和宋内志贺菌株中，三者均阳性 浙江大学博士学位论文的菌株仅有6株，阳性率为9.4%。对其可变区测序分析，其中2株宋内志贺菌I类整合子均携带1个基因盒，为氨基糖昔腺营酞基转移酶（aminoglycosideadenylyltransferase）AZ基因（aa朔2），编码对链霉素的抗性。另2株宋内志贺菌I类整合子携带2个基因盒，分别紧邻5’保守区依次为二氢叶酸还原酶（dihydrofolatereductase） Al型基因（咖月I）和氨基糖昔腺普酞基转移酶Ala基因是（a adAla），以及二氢叶酸还原酶A17型基因(动讨I乃和氨基糖昔腺昔酞基转移酶Ala基因(aa咖习。1株福氏志贺菌y变种携带的基因盒类型与其中一株宋内志贺菌相同，为护汉17和aad减万。1株福氏6型志贺菌携带一个dfrV基因盒。分别提取2株携带典型I类整合子的宋内志贺菌株基因组DNA和质粒DNA（其中基因组DNA经B“mHI和PstI限制酶切），琼脂糖凝胶电泳后，intll探针Southenblot结果显示典型整合子是位于质粒上的。 2.非典型I类整合子的分布及一级结构特征 在检测典型I类整合子过程中，发现了30株intll阳性，但可变区阴性、3’保守区阳性仅有3株（阳性率为5.1%），推测福氏志贺菌株中可能广泛存在着某种非典型I类整合子。选择此类菌株分别提取基因组DNA和质粒DNA（其中基因组DNA经BamHI和Pstl限制酶切），琼脂糖凝胶电泳后，intll探针SOuthenblot结果显示提示此intll是位于细菌染色体上的。将其中CIOI一1株基因组DNA中intll阳性的BamHI和Pstl限制酶切段（3 .4 kb）克隆至载体pUC19上（此质粒称为puc一C101），并进行核酸序列测定。序列分析表明此插入片段依次由intll基因、attl位点以及blaoxA30和aadAI基因盒组成，典型I类整合子3’保守区部分被一段插入序列151所替代。2个ORF分别编码p内酞胺酶OXA一30和氨基糖普腺昔酞基转移酶Al。 应用扩增此型基因盒区的引物intl Ica一F和引物15 Ica一R，对本文所有菌株进行PCR扩增，结果30株intll阳性的无典型I类整合子的志贺菌株中（1株宋内志贺菌，29株福氏志贺菌），29株扩增出相同长度的PCR产物，而6株携带典型I类整合子的志贺菌和其余28株intll阴性的志贺菌均未扩增出阳性条带（见表l）。结果表明，此29株intll阳性志贺菌株有着相同的基因盒区，我们将之称为志贺菌非典型I类整合子（intll和intH一151同时阳性）;福氏志贺菌中此非典型I类整合子总 浙江大学博士学位论文检出率高达84.8%（28/33），尤其是福氏2a和2b中均为100%（13/13和9/9）:宋内志贺菌中则较低，为3.2%（l/31）。非典型I类整合子阳性菌株中氨节青霉素抗性的阳性率分别为100%（21/2l），而其他非典型I类播合子阴性菌株中为51.9%（14/27）。 3.非典型I类整合子的基因盒切除模式 我们使用反转PcR在携有pUC一c101的大肠埃希菌过夜培养肉汤煮沸物中检测到了游离基因盒的存在，并发现了aadAI基因盒与blaoxA-30基因盒连锁的切除模式。结果表明，此非典型I类整合子是功能性的。 4.H类整合子分布及其一级结构特征 通过检测n类整合子intIZ基因，结果发现H类整合子在宋内和福氏志贺菌中分布广泛，阳性率分别达80.6%（25/31）和87.9%（29/33）。进一步研究表明11类整合子是位于染色体上的。 提取intIZ阳性的宋内志贺菌C202株的基因组DNA，将一条含intIZ的去斤”dm限制酶切段（10.7 kb）克隆至载体pUC19上(此