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拷贝数变异是引起遗传疾病的常见原因,其中基因大片段缺失是导致多种遗传疾病的主要原因。目前常用的基因大片段缺失检测方法存在操作繁琐、成本高、需要PCR(Polymerase Chain Reaction)后处理等不足。多色探针熔解曲线分析技术(Multicolor Melting Curve Analysis,MMCA)是一种简便、高效、经济、无需PCR后处理的基因检测方法,因此我们以21-羟化酶缺乏症(21-hydroxylase deficiency,21-OHD)和杜氏肌营养不良症(Duchenne Muscular Dystrophy,DMD)为研究对象,探讨MMCA在遗传疾病基因大片段缺失的快速检测方面应用的可行性。第一章,首先简述遗传疾病和拷贝数变异的概念及种类,基因大片段缺失作为拷贝数变异中的重要组成部分,是引起许多遗传疾病的主要原因。其次介绍了目前用于基因大片段缺失的检测方法及不足,并以此提出了本文的研究内容:通过建立21-OHD和DMD的基因大片段缺失检测体系考察MMCA应用于遗传疾病基因大片段缺失检测的可行性。第二章,以21-OHD基因CYP21A2完全缺失为检测目标,结合第一轮预扩增和第二轮PCR检测,建立了CYP2LA2基因完全缺失检测体系,实现了对常见的4种CYP21A2基因完全缺失类型的检测。使用人类基因组样本对体系的灵敏度进行考察,结果表明灵敏度可达500 pg/反应。利用40份野生型基因组标本进行体系重复性考察,体系熔解峰Tm的波动范围为70.3 4±0.23(℃,mean±3SD),变异系数CV为0.11%,说明体系的重复性好。此外还通过检测不同类型的标本对体系的稳定性进行考察,体系稳定性良好。利用临床标本对体系进行验证,检测结果与对照方法多重连接探针扩增技术(multiplex ligation-dependent probe amplification,MLPA)的结果一致,说明体系能够用于临床标本的检测,并具有操作简便、成本低廉、无需PCR后处理等优势。第三章,我们根据文献数据分析筛选出DMD基因DMD的17个高频缺失外显子,通过熔解阵列法建立了单管十八重DMD基因大片段缺失检测体系,可检测超过98%的DMD基因大片段缺失类型。利用野生型人类基因组模板对体系的灵敏度进行考察,结果显示体系灵敏度可达2.5 ng/反应。通过40份随机样本的单次和三次重复检测,对体系的重复性进行考察,体系熔解峰的Tm值波动范围不超过1℃,变异系数CV值不超过0.5%,说明体系重复性良好。此外,我们在41份临床标本中检测出26份基因片段不同程度缺失的标本,基因缺失频率为63.4%(26/41),与文献报道的频率相符。此前41份标本已通过MLPA验证,我们的检测方法与对照方法MLPA的一致率为98%(40/41)。本体系能够对DMD基因大片段缺失患者进行检测,并且具有无需PCR后处理、检测时间短、操作简便、重复性好、成本低廉等优势,适用于我国DMD基因大片段缺失的大规模筛查。