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目的:脑胶质瘤是最常见的颅内原发恶性肿瘤,针对它的光动力治疗(photodynamic therapy,PDT)和免疫治疗日渐成为研究的热点。因此本研究通过将PDT和基于树突状细胞(dendritic cell,DC)的免疫治疗结合,将C6胶质瘤细胞经光动力法处理后,用酸洗法获取其表面抗原肽致敏DC制备DC疫苗,研究其诱导的大鼠细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)在体外杀伤C6细胞的活性,以及PDT对C6胶质瘤细胞免疫原性的直接影响,从而为PDT和免疫疗法结合治疗神经胶质瘤找到了新的切入点。
方法:自大鼠骨髓分离DC前体细胞,在体外经粒细胞.巨噬细胞集落刺激因子(Granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-GSF)和白细胞介素-4(interluekin-4,IL-4)诱导、扩增获得成熟DC。C6细胞经PDT处理后,对尚贴壁的细胞以弱酸洗脱法获取其表面抗原;同时从光照后的上清液中直接提取全细胞抗原。而未作PDT处理的C6细胞以弱酸洗脱法或反复冻融法提取抗原。然后分别以这四种抗原致敏DC,制成DC疫苗然后经尾静脉接种SD大鼠,连续3周共3次后,取脾作CTL的体外杀伤活性测定。
结果:①本实验诱导培养出的DC具有典型的细胞形态学特征和细胞表面标志物的表达。所培养的DC在后续实验中的使用也证明其抗原呈递功能正常,因此是一种简单实用培养DC的方法。②随着光敏剂浓度及光照时间的增加,肿瘤细胞的死亡率增高,但当死亡率超过某个值以后,继续增加光动力剂量,肿瘤细胞死亡率的升高明显变缓。HMME浓度为5ug/ml,照射时间为2min时,C6细胞死亡率为70﹪。③四种疫苗诱导CTL的体外杀伤活性:光照后酸洗组为95.5﹪±0.016,光照后上清组为90.2﹪±0.024,酸洗组为73.3﹪±0.027,冻融组为63.6﹪±0.049,PBS对照组为0.4﹪±0.063,几乎无杀伤作用。结果表明PDT后酸洗获得的抗原刺激DC成熟的能力最强,它制备的DC疫苗诱导的CTL体外杀伤率明显高于其它各组。
结论:PDT能直接增强肿瘤细胞的免疫原性,用酸洗法获取PDT处理后的肿瘤细胞表面抗原肽制备DC疫苗是一种有前景的新方法。