【摘 要】
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目的Wnt/β-catenin信号与细胞增殖、分化及组织发育密切相关[1],近年来在神经病理性疼痛研究领域也受到广泛关注。三叉神经痛（Trigeminal neuralgia,TN）是临床上常见的一种神经病理性疼痛（Neuropathic pain,NP）,其发病机制尚未完全阐明。本课题拟通过建立三叉神经根区慢性压迫大鼠模型,分析Wnt/β-catenin信号相关分子在TN模型大鼠TREZ区的表达
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目的Wnt/β-catenin信号与细胞增殖、分化及组织发育密切相关[1],近年来在神经病理性疼痛研究领域也受到广泛关注。三叉神经痛（Trigeminal neuralgia,TN）是临床上常见的一种神经病理性疼痛（Neuropathic pain,NP）,其发病机制尚未完全阐明。本课题拟通过建立三叉神经根区慢性压迫大鼠模型,分析Wnt/β-catenin信号相关分子在TN模型大鼠TREZ区的表达特点,明确星型胶质细胞的活化类型及其与Wnt/β-catenin信号通路活化二者之间的相关性,进一步应用慢病毒介导Sh RNA靶向沉默TREZ区β-catenin的表达,探讨Wnt/β-catenin信号与星形胶质细胞参与TN外周敏化的可能机制。方法1.成年雄性SD大鼠随机分为4组:假手术组（Sham组）、TN组、TN+LV-scramble sh RNA组、TN+LV-β-catenin sh RNA组。TN大鼠模型通过右侧眶下裂细导丝颅内插管压迫TREZ的方法建立。von Frey丝检测各组大鼠口面部机械痛阈值。2.Western blot检测术后7、14、21、28天Sham组与TN组TREZ区Wnt信号通路配体Wnt-3a、Activeβ-catenin、卷曲受体Frizzled 8等Wnt信号相关蛋白,补体C1q、白介素IL-18、肿瘤坏死因子TNF-α等炎症相关介质的表达量,以及TREZ局部靶向敲减β-catenin后activeβ-catenin、C1q的表达量变化。免疫荧光双标染色法检测Activeβ-catenin在TREZ区的表达及定位。3.运用免疫荧光方法,观察术后14天、21天Sham组与TN组TREZ区Frizzled-8与星形胶质细胞标记物胶质纤维酸性蛋白GFAP与Iba1阳性细胞共定位情况;观察术后14天、21天TREZ区GFAP和补体C3共定位情况,研究GFAP/C3共标免疫双阳性突起数量占总GFAP免疫阳性突起数量的比例。结果1.口面部机械痛阈值检测结果显示,TN组大鼠在术后第14天、28天机械痛阈值明显下降,与sham组相比,差别有统计学意义（p<0.05）。与TN+LV-scramble sh RNA组相比,TN+LV-β-catenin sh RNA组大鼠术后21天机械痛阈值明显上升,并持续至术后28天。2.Western Blot结果显示,Wnt-3a、Frizzled 8、Activeβ-catenin、C1q的蛋白表达量在TN组明显升高,特异性沉默β-catenin后C1q表达量显著下调（p<0.05）。3.免疫荧光结果显示,慢性压迫损伤后TN组大鼠TREZ区中枢端星形胶质细胞内Activeβ-catenin的表达明显增强,并可见Iba1阳性细胞与Activeβ-catenin共定位。慢性压迫损伤后TN组大鼠可见有明显与GFAP共定位,亦可见与Iba1阳性细胞共定位。此外,慢性压迫损伤后不同时间点TN组、TN+LV-scramble sh RNA组大鼠TREZ交界区及毗邻的外周侧GFAP/C3双阳性突起数目均显著增多,以术后14、21天最为显著。靶向敲低β-catenin后TN+LV-β-catenin sh RNA组TREZ区C3荧光表达强度及GFAP/C3双阳性突起数目占总GFAP免疫阳性突起比例均显著降低,与TN+LV-scramble sh RNA组相比,差别有显著性意义（p<0.05）。结论1、慢性机械压迫上调TREZ区Wnt-3a、Frizzled 8、Activeβ-catenin表达及A1型星形胶质细胞活化;2、Wnt3a/β-catenin/C1q信号介导A1型星形胶质细胞活化参与TN外周敏化。
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