结直肠癌组织细菌分离培养与鉴定及脆弱拟杆菌感染细胞实验

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[目的]在世界范围内,结直肠癌作为恶性肿瘤疾病,以其高发病率威胁着人类的健康,多年的研究证据已表明肠道菌群在结直肠癌的发生发展过程中起着重要的促进作用。本研究通过对结直肠癌组织中的厌氧菌进行分离培养与鉴定,了解组织中菌群的结构及组分;鉴定与结直肠癌的发生发展相关的核心肠道菌群,筛选与结直肠癌发生发展关系密切的细菌作为研究对象;通过细菌感染细胞实验,了解分离所得肠毒性脆弱拟杆菌对KMB17细胞的感染能力。[方法]采集51例2014年至2015年结直肠癌患者手术的组织样本;在厌氧条件下分离样本中的细菌,经PCR扩增细菌16SrRNA基因,利用16SrRNA基因可变区菌属间变异性鉴定细菌种属;通过分离得到细菌的检出率确定结直肠癌组织中的核心菌群;利用分离得到的肠毒性脆弱拟杆菌感染KMB17细胞,通过透射电镜和免疫荧光法观察感染情况。[结果]本实验从组织样本中经厌氧培养分离鉴定出172株、35种细菌,其中费格森埃希菌、粪肠球菌、脆弱拟杆菌、多形拟杆菌等检出率较高,是结直肠癌组织样本中的核心菌群;通过透射电镜及免疫荧光检测均可在细胞内观察到肠毒性脆弱拟杆菌,证实肠毒性脆弱拟杆菌成功进入胞内感染KMB17细胞。[结论]在结直肠癌肿瘤组织样本中致病菌或条件致病菌较益生菌在种类数量上都有一定优势,费格森埃希菌、粪肠球菌、脆弱拟杆菌、索氏志贺氏菌等致病菌和条件致病菌在结直肠癌的发生发展过程中可能起着重要作用;分离所得肠毒性脆弱拟杆菌能成功进入细胞内感染KMB17细胞。
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