目的:观察续苓健骨方对骨质疏松模型大鼠骨密度、形态学和BMP/Smads信号通路相关基因表达的影响,以探讨该方治疗绝经后骨质疏松症的分子机制。方法:1.动物模型的建立将40只6月龄清洁级雌性SD大鼠以随机数字表法随机分成假手术组、模型组和续苓健骨方低剂量组(以下简称低剂量组)、中剂量组(以下简称中剂量组)、高剂量组(以下简称高剂量组),每组8只。采用去卵巢的方法,对除假手术组外的所有大鼠行双侧卵巢切除术,建立骨质疏松大鼠模型,假手术组切除卵巢附近适当大小的脂肪组织。2.药物干预造模30天后开始灌胃给药:低、中、高剂量组给药剂量分别为每只7.5g/(kg*d)、15g/(kg*d)、30g/(kg*d),模型组及假手术组每只大鼠予生理盐水15g/(kg*d),连续给药12周。3.指标检测:麻醉大鼠取材,分离大鼠腰椎椎体及左右胫骨标本,进行相应处理及各项指标的检测。取右侧胫骨,清除周围软组织,用生理盐水冲洗干净,采用Hologic Discovery W型双能X线骨密度测量仪测定各组大鼠胫骨骨密度(Bone Mineral Density,BMD)。取左侧胫骨固定、脱钙后包埋切片,采用苏木精-伊红染色法(Hematoxylin-Eosin stain ing,HE),观察胫骨骨小梁形态并对其进行图像采集和分析。取大鼠腰椎进行逆转录聚合酶链式反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR),检测骨形态发生蛋白4(Bone Morphogenetic Protein 4,BMP4)、Smad1、Smad5、Smad9 m RNA的表达情况。对所得数据进行统计分析,符合正态分布的数据进行单因素方差分析(one-way ANOVA):如果方差齐,采用LSD法;若方差不齐,采用Dunnett’s T3法,不符合正态分布的数据采用非参数检验中的Kruskal-Wallis单因素方差分析,以α=0.05作为差异存在统计学意义的界限。结果:1.体重及BMD情况:各组大鼠取材时体重相近,除假手术组体重高于模型组外(P<0.05),其余各组间比较,差别均无统计学意义。骨密度方面:假手术组右侧胫骨离体BMD最高,模型组BMD最低。组间比较表明假手术组及中剂量组BMD高于其他各组(P<0.05),差别有统计学意义。2.形态学结果:HE染色后可见各组胫骨骨骺线下骨小梁情况差异明显:假手术组骨骺线下骨小梁多,排列紧密,分布均匀,骨小梁间距小,且排列规则,呈网状分布。模型组胫骨骨骺线下骨小梁少,排列稀疏,分布不均,髓腔中心较外周骨小梁含量减少更明显,骨小梁间距大。中剂量组骨骺线下骨小梁数量较假手术组稍少,但明显多于模型组,其排列较均匀,骨小梁间距不大。低、高剂量组骨小梁数量明显少于假手术组,但仍比模型组多,排列较稀疏,骨小梁间距较大。3.形态学数据结果:假手术组骨小梁面积百分数(Percent Trabecular area,%Tb.Ar)最高,模型组最低。假手术组%Tb.Ar高于模型组、低、高剂量组(P<0.05)。中剂量组%Tb.Ar高于模型组(P<0.05)。其余各组间比较均无差异(P>0.05)。假手术组骨小梁厚度(Trabecular Thick,Tb.Th)最高,模型组最低。假手术组高于模型组及高剂量组(P<0.05),中剂量组高于模型组(P<0.05)。其余各组间比较均无差异(P>0.05)。模型组骨小梁分离度(Trabecular Separation,Tb.Sp)远高于其他各组(P<0.05)。其余各组之间差别无统计学意义(P>0.05)。以上结果进一步佐证了形态学镜下观察的结果,假手术组和中剂量组的%Tb.Ar和T b.Th高于其他各组,模型组的Tb.Sp高于其他各组,提示假手术组和中剂量组的骨微结构较好,模型组的骨微结构较差。4.RT-PCR结果:模型组BMP4、Smad1、Smad5、Smad9 mRNA的表达水平在各组中均为最低。假手术组BMP4 mRNA的表达明显高于其他组(P<0.05),中剂量组BMP4 mRNA的表达高于模型组(P<0.05)。其余各组比较无明显差异。(P>0.05)假手术组Smad1、5、9 mRNA的表达基本均高于模型组、低剂量组及高剂量组(P<0.05),与中剂量组相差不大(P>0.05)。中剂量组Smad1的表达高于模型组(P<0.05),Smad5、9的表达虽与模型组的差别无统计学意义,但其相对定量的数值差别较大,无意义可能与其标准差过大有关。结论:动物实验证实续苓健骨方可提高骨质疏松模型大鼠的骨密度,改善其骨组织微结构,提高BMP/Smads通路中BMP4、Smad1、Smad5、Smad9 mRNA的表达,其中以中剂量组效果最佳。这说明续苓健骨方对骨质疏松症有较好的干预作用,其分子机制与BMP/Smads信号通路有关。