龙须菜多糖的降解及其降解产物生物活性的研究

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龙须菜多糖具有抗氧化、抗肿瘤、抗病毒、免疫调节等生物活性,是一种高活性物质。但由于多糖的分子量较大,限制其进入机体细胞中发挥作用,从而阻碍活性的发挥。本文以龙须菜为研究对象,采用单因素法和正交优化实验,获得龙须菜多糖的最优提取方案,经分离纯化获得较纯多糖;通过响应面优化盐酸降解龙须菜多糖过程,获得最优降解方案;分析研究了降解后产物的结构组成,以及抗氧化、降血脂等生物活性。为龙须菜多糖的合理利用提供了理论依据。1)本试验以多糖的得率为指标,进行固液比、时间、温度、提取次数等单因素试验,通过因素显著性分析,最终选择固液比(w/v)、时间(h)、温度(℃)等三个因素进行正交试验,优化提取工艺。得到的最佳提取工艺为固液比为1:45、温度为95℃、时间为5h,此时龙须菜多糖的提取率为38.22%。Sevag法除蛋白以3遍为宜。2)分别在不同的盐酸浓度、时间、温度、底物浓度等因素条件下,通过分析龙须菜多糖的降解产物对Fe3+的还原能力,判断酸解的合理性以及以还原糖的相对含量为考察指标的可行性。为考察龙须菜多糖的降解效果,选取盐酸浓度、降解时间、降解温度、底物浓度等因素进行单因素试验,并以还原糖的相对含量为指标,通过进行因素显著性分析及结合实际操作,最后选取降解时间、降解温度、底物浓度等因素进行工艺的响应面法优化,获得最佳的龙须菜多糖酸解工艺为底物浓度2.5%(w/v)、温度90-C、时间90min。4个单因素中,底物浓度对指标的影响是最显著的(P<0.01)。3)龙须菜多糖降解后的产物经过sephadex G-25层析柱分离纯化,洗脱出3个洗脱峰,第一个洗脱峰较为明显。故收集第一个洗脱峰的组分进行研究,得知这个组分的低分子龙须菜多糖的相对分子质量范围为3100~4400Da。其3,6-内醚半乳糖含量为55.39±2.18%,硫酸基含量为7.53±0.60%,对比于龙须菜多糖其硫酸基含量、3,6-内醚半乳糖的含量均降低,但并没有去硫酸化。结合红外光谱法以及核磁共振得知龙须菜多糖在降解前后的特征吸收峰和活性基团吸收峰都十分相似,重要官能团没发生明显变化。4)分别比较了龙须菜多糖降解前后对.OH的清除率和对DPPH-的清除能力,龙须菜多糖降解后对-OH的清除能力比降解前略有降低,而龙须菜多糖降解前后对应的清除DPPH-的IC50约为4.57mg/mL和4.26mg/mL,总体说明两者清除DPPH-的能力相当。5)采用治疗性-脂代谢紊乱模型法研究低分子量龙须菜多糖对高脂小鼠模型的降血脂和抗氧化作用,研究得出:小鼠体重在喂食低分子龙须菜多糖后,体重增加明显减缓,肝脏、脾脏略有变化,低分子龙须菜多糖能显著降低血液中TG、TC、LDL-C,显著升高HDL-C;提高血清和肝脏中T-SOD、GSH-Px的活性,降低MDA含量,具有降血脂和体内抗氧化作用。
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