【摘 要】
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本实验通过RT-PCR从番茄花粉中获得高效特异表达的高赖氨酸基因TSB的cDNA序列,构建其受控于单子叶植物Ubil强启动子下的高效表达质粒pBIUB-TSB。与此同时,以禾本科牧草中间偃
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本实验通过RT-PCR从番茄花粉中获得高效特异表达的高赖氨酸基因TSB的cDNA序列,构建其受控于单子叶植物Ubil强启动子下的高效表达质粒pBIUB-TSB。与此同时,以禾本科牧草中间偃麦草为材料,以它的成熟种子为外植体,建立简单的植株再生体系,并将构建好的表达载体通过基因枪和激光微束穿刺转化法将其导入到中间偃麦草愈伤组织中,通过卡那霉素筛选,得到再生植株。实验结果表明:我们建立了中间偃麦草简单的植株再生体系:(1)愈伤诱导培养基:MS+2.4-D(4.5mg/L)+BA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.5g/L pH值5.8~6.0;(2)愈伤继代培养基:MS+2.4-D 4mg/L+BA 0.1mg/L+Vc 5mg/L+蔗糖30g+琼脂6.5g/L+肌醇100mg/L pH值5.8~6.0;(3)芽分化培养基:MS+BA 2mg/L+NAA1mg/L +CoCl2 5mg/L+ZT 0.5mg/L+蔗糖30g+肌醇100mg/L+琼脂6.5g/L PH值5.8~6.0;(4)生根培养基:1/2MS+ IAA0.5mg/L +NAA0.5mg/L+活性炭0.1%+蔗糖30g+琼脂6.5g/L pH值5.8~6.0。在卡那霉素为300mg/L的筛选压力下,两种转化法都得到了一些再生植株,经过PCR和Southern blotting检测,有4株成阳性,证明高赖氨酸基因TSB已经整合到了中间偃麦草的基因组中,其中通过基因枪转化获得2株,激光微束穿刺转化获得2株。
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