论文部分内容阅读
目的：探究载脂蛋白E(ApoE)对髓鞘抗原诱导免疫后的的小鼠脾脏淋巴细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-17（IL-17）以及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)表达的影响。 方法：用0.01mol/L的PBS缓冲溶液将少突胶质细胞糖蛋白(MOG35-55)稀释至2mg/ml，与等量的含4mg/ml热灭活结核菌素(H37Ra)的完全弗氏佐剂充分混匀，在冰上使用全玻璃注射器抽打制备成油包水乳剂抗原。在同源的ApoE基因缺失型(ApoE-/-)和野生型(WT)型的C57BL/6J成年期雌性小鼠背部皮下多点注射已制备的MOG35-55乳剂抗原（0.2ml/只）。免疫当天、免疫后48h给每只小鼠腹腔各注射一次百日咳毒素（200ng/次/只）。免疫诱导后第7d取小鼠脾脏，分离提取小鼠脾脏淋巴细胞并进行体外培养，随机将两种小鼠中提取的淋巴细胞分为四组，即ApoE-/-实验组（E-ApoE-/-）、WT实验组(E-WT)、ApoE-/-对照组（C-ApoE-/-）、WT对照组(C-WT)。用25μg/ml的MOG35-55刺激两实验组（E-ApoE-/-组和E-WT组）的淋巴细胞，两对照组淋巴细胞（C-ApoE-/-组和C-WT组）给予等量生理盐水进行处理，24小时后，分别离心并收集各组淋巴细胞培养上清液。采用酶联免疫吸吸附实验(ELISA)测定各组细胞分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-17（IL-17）、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)的浓度变化情况并进行统计学分析。 结果：(1)ApoE-/-小鼠和WT小鼠被髓鞘抗原免疫诱导后，其脾脏淋巴细胞（C-ApoE-/-组和C-WT组）均能分泌TNF-α、IL-17、MMP-9，ApoE-/-小鼠（C-ApoE-/-组）相对于WT小鼠（C-WT组）脾脏淋巴细胞TNF-α、IL-17、MMP-9分泌的量增加，差异有统计学意义(P＜0.05);(2)体外用髓鞘抗原MOG35-55单独刺激两种小鼠脾脏淋巴细胞后，两实验组（E-ApoE-/-组和E-WT组）淋巴细胞TNF-α、IL-17、MMP-9的浓度相对于两对照组(C-ApoE-/-组和C-WT)明显升高，且E-ApoE-/-组较E-WT组浓度升高更明显，差异有统计学意义(P＜0.05);(3)免疫诱导和体外用MOG35-55刺激各组小鼠脾脏淋巴细胞后，均能表达TIMP-1，但各组小鼠脾脏淋巴细胞TIMP-1的浓度未见明显差别，差异无统计学意义(P＞0.05)。 结论：髓鞘抗原刺激小鼠脾脏淋巴细胞可以使其表达炎症因子TNF-α、IL-17和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1);ApoE缺乏可以使脾脏淋巴细胞分泌的炎症因子TNF-α、IL-17和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)明显增加，进而可能影响血脑屏障的完整性，但ApoE缺乏对小鼠脾脏淋巴细胞TIMP-1表达的量无明显影响。ApoE、炎症因子、基质金属蛋白酶-9三者之间的关系可以作为对诸如多发性硬化等免疫介导的炎性脱髓鞘疾病中血脑屏障损伤机制研究及其治疗策略研究的切入点。