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目的: 本实验通过检测富血小板纤维蛋白提取液(Platelet-rich fibrin extract。PRFe)对肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor-α。TNF-α)刺激下的人牙周膜细胞(Human Periodontal Ligament Cells。hPDLCs)成骨分化及矿化效能的影响,为富血小板纤维蛋白用于临床牙周炎再生性相关治疗提供实验及理论依据。 方法: 实验一:组织块法分离培养hPDLCs,免疫组化法鉴定细胞来源 实验二:Choukroun法制取 PRFe。MTT法检测不同体积分数的PRFe对hPDLCs增殖活性的影响以确定最适宜体积分数的PRFe用于后续实验。 实验三:PRFe对经TNF-α刺激下的人牙周膜细胞成骨效能的影响。 ⑴实验分组①空白对照组;②TNF-α(10ng/mL)组;③PRFe组;④PRFe+TNF-α(10ng/mL)组 ⑵碱性磷酸酶试剂盒检测各实验组ALP活性 ⑶茜素红染色法观察各实验组细胞矿化功能 ⑷Western Blotting法检测各组细胞中Runx2、Osterix蛋白的含量。 结果: 1.倒置相差显微镜下观察细胞形态呈长梭形。牙周膜细胞波形丝蛋白染色阳性,而角蛋白14染色阴性,证实细胞为间充质来源而非上皮性来源。 2. MTT法检测不同体积分数的PRFe对 hPDLCs增殖活性的影响,结果显示50%体积分数的PRFe吸光度值高于其他实验组(P<0.05)。 3.选择体积分数为50%的PRFe用于后续实验,ALP活性检测、茜素红染色和Western Blotting结果显示: ①TNF-α组各项指标均低于空白对照组(P<0.05) ②PRFe组各项指标均高于空白对照组(P<0.05) ③PRFe+TNF-α组各项指标均高于TNF-α组(P<0.05) ④PRFe组各项指标均高于PRFe+TNF-α组(P<0.05)。 结论: 1 PRFe具有促进体外hPDLCs增殖以及成骨分化的作用。 2 PRFe具有促进经TNF-α刺激的人牙周膜细胞成骨分化能力的作用。 3 PRF可能在牙周炎再生性治疗中具有重要的临床意义。