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背景:糖尿病（DM）患者常处于高血糖、脂代谢紊乱、高血压等多重危险因素簇集的状态,这些危险因素互相影响,共同促进动脉粥样硬化（AS）的发生与发展。AS是心脑血管疾病的病理基础,内皮功能障碍（ED）不仅是AS发生的始动环节,也是促进其进展的重要因素,但是ED的发病机制极其复杂,至今尚未完全阐明。血管内皮细胞中的自噬是针对许多病理生理刺激的一种保护机制。近年来研究发现,自噬与ED及AS的发生发展均密切相关。当内皮受到氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）、晚期糖基化终末产物（AGEs）等刺激时,内皮细胞可通过激活自身自噬来抵抗内皮炎症反应或氧化应激,而自噬受损可能是引发ED的主要机制之一。细胞自噬的发生是多因素参与的复杂过程,可受雷帕霉素靶蛋白（mTOR）途径的负向调控。硒蛋白S（SelS）是一种跨膜的糖调节蛋白,可通过抗氧化应激、炎症反应、凋亡等途径发挥内皮保护作用。但SelS能否通过调节Akt/mTOR自噬通路保护内皮免受高糖和/或高脂的损伤尚不清楚。本研究拟通过观察不同SelS表达水平对高糖和/或高脂诱导的血管内皮损伤及Akt/mTOR自噬通路的影响,探讨SelS对内皮保护作用及可能机制,为SelS成为防治AS新的、有效的干预靶点提供实验依据及理论基础。方法:利用不同浓度糖或脂干预人主动脉内皮细胞（HAECs）,测定细胞生存率,构建高糖和/或高脂诱导HAECs损伤模型。应用Western Blot方法检测内皮一氧化氮合酶（eNOS）、内皮素-1（ET-1）、细胞间粘附因子-1（ICAM-1）、血管细胞黏附因子-1（VCAM-1）及SelS蛋白表达水平的变化,探讨高糖和/或高脂对HAECs损伤与SelS的关系。应用透射电镜观察高糖和/或高脂干预后HAECs自噬小体,荧光显微镜观察指示自噬小体的mRFP-GFP-LC3荧光点状聚集,Western Blot 方法检测 LC3 Ⅱ/Ⅰ、P62、Beclin-1 表达及 Akt/mTOR 磷酸化水平的变化,探讨高糖和/或高脂诱导HAECs损伤与自噬及Akt/mTOR自噬通路的关系;应用慢病毒感染技术获得过表达及低表达SelS的HAECs,高糖和/或高脂干预过表达或低表达SelS的HAECs,应用Western Blot方法检测eNOS、ET-1、ICAM-1,荧光显微镜观察指示自噬小体的mRFP-GFP-LC3荧光点状聚集,Western Blot方法检测LC3 Ⅱ/Ⅰ、P62、Beclin-1表达及Akt/mTOR自噬通路蛋白磷酸化水平的变化,探讨调节SelS表达对高糖和/或高脂诱导的HAECs损伤及Akt/mTOR自噬通路的影响。结果:成功构建高糖和/或高脂诱导HAECs损伤模型:高糖（Glu 35mmol/L）干预导致 HAECs 存活率为（76.57± 4.47）%,高脂（ox-LDL 50mg/L）干预导致HAECs存活率为（72.74± 6.59）%,高糖联合高脂（35mmol/L Glu+50mg/L ox-LDL）干预导致 HAECs 存活率为（55.84±5.35）%。高糖和/或高脂干预下,eNOS蛋白水平呈时间依赖性减少（P<0.05）,ET-1、ICAM-1蛋白水平呈时间依赖性增加（P<0.05）,表明随高糖和/或高脂干预时间的延长,HAECs损伤逐渐加重。高糖和/或高脂干预下,SelS蛋白水平呈时间依赖性增加（P<0.05）,提示,SelS与高糖和/或高脂诱导的HAECs损伤有关。高糖和/或高脂诱导HAEC自噬水平先增加后减少,干预6h自噬水平最高。高糖和/或高脂干预HAECs 6h时,导致HAECs损伤:eNOS表达减少,ET-1、ICAM-1表达增加,尤以高糖联合高脂组最为显著（P<0.05）;同时伴有SelS表达增加,其中高糖联合高脂组与高脂组增加最显著（P<0.05）;均导致HAECs自噬显著增加:自噬小体增加,指示自噬小体的mRFP-GFP-LC3荧光点状聚集增加,LC3 Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1表达增加,自噬产物降解相对不足,P62表达增加,其中高糖联合高脂组增加最显著（P<0.05）。高糖和/或高脂干预6h时,HAECs表达p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR 比值均显著减少,提示Akt/mTOR通路受到抑制,其中高糖联合高脂组抑制最显著（P<0.05）。高糖和/或高脂干预6h时,SelS表达均增加,其中高糖联合高脂组及高脂组较高糖组增加更显著（P<0.05）,提示SelS可能与高糖和/或高脂诱导的HAECs自噬及Akt/mTOR通路有关。过表达SelS能改善高糖和/或高脂诱导的HAECs损伤:显著增加eNOS表达水平,显著降低ET-1、ICAM-1表达水平（P<0.05）;抑制HAECs自噬:显著减少指示自噬小体的mRFP-GFP-LC3荧光点状聚集,减少LC3 Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1蛋白表达水平,增加P62蛋白表达（P<0.05）。而低表达SelS时,与过表达SelS结果正好相反,使高糖和/或高脂诱导的HAECs损伤进一步加重:显著减少eNOS表达,增加ET-1、ICAM-1表达水平（P<0.05）;激活HAECs自噬:增加指示自噬小体的mRFP-GFP-LC3荧光点状聚集,增加LC3 Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1蛋白表达,减少P62蛋白表达（P<0.05）。过表达SelS时,高糖和/或高脂诱导HAECs 表达 p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR 比值增加（P<0.05）,提示 Akt/mTOR通路被激活;低表达SelS时,高糖或高脂诱导HAECs表达p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR 比值减少（P<0.05）,提示Akt/mTOR通路被抑制。结论:1.高糖和/或高脂以时间依赖的趋势损伤内皮细胞,同时伴有自噬水平和SelS蛋白表达水平的变化,提示SelS与高糖和/高脂导致的内皮损伤及自噬有关。2.高糖和/或高脂诱导HAEC自噬呈先增加后减少的动态变化,p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR 比值显著减少,SelS表达增加,提示SelS与高糖和/或高脂诱导的内皮细胞损伤及Akt/mTOR通路有关。3.高表达SelS时,Akt/mTOR通路激活,HAEC自噬受抑制,高糖和/或高脂诱导的内皮细胞损伤改善;而低表达SelS与此结果相反。表明SelS可能通过调节Akt/mTOR自噬通路保护内皮免受高糖和/或高脂的损伤。