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[目的]通过研究hPDLSCs的免疫调节特性及其在免疫调节过程中的作用,进一步探讨miR-17对hPDLSCs免疫调节特性、增殖及凋亡的影响,为牙周炎的发生发展及治疗奠定理论基础。[方法](1)使用有限稀释法克隆化培养获得hPDLSCs,利用克隆形成实验和流式细胞术检测hPDLSCs增殖能力;免疫荧光细胞化学检测间充质干细胞表面分子CD146和STRO-1;流式细胞术检测间充质干细胞表面标记物(CD90、CD13和CD44)、造血干细胞表面标记物(CD45和CD34)以及内皮细胞表面标记物(CD31)。并通过体外成骨、成脂肪诱导检测hPDLSCs的多向分化能力。(2)建立hPDLSCs与PBMCs共培养体系,实验分组为对照组及共培养组,通过qRT-PCR和Elisa分别检测共培养体系中的免疫调节因子及炎性因子mRNA及蛋白的表达,探究所培养的hPDLSCs是否具有免疫调节性能。所检测因子如下:TGF-β、IDO、IL-10、TNF-α、IFN-γ、IL-1α。(3)构建 miR-17 的 mimics(pre-miR-17)和 inhibitor(anti-miR-17)转染 hPDLSCs,将其分别与活化的 PBMCs建立Transwell共培养体系。通过qRT-PCR、Western blot和Elisa三种方法分别检测共培养体系中各组免疫调节因子(TGF-β、IDO、IL-10)mRNA和蛋白的表达情况,探究miR-17对共培养后可溶性免疫调节因子分泌的影响。其次,通过流式细胞仪检测各组hPDLSCs的周期与凋亡,探究miR-17对hPDLSCs增殖及凋亡的影响。[结果](1)采用有限稀释法克隆化培养的hPDLSCs,形态为长梭形或不规则型,细胞排列呈旋涡状和放射状;克隆形成实验及细胞周期的检测发现hPDLSCs有较高的增殖能力;免疫荧光分析细胞表面分子显示hPDLSCs阳性表达间充质干细胞表面标记物STRO-1、CD146;流式细胞术分析细胞表面分子显示hPDLSCs高表达间充质干细胞表面标记物CD90、CD13、CD44,低表达造血干细胞表面标记物CD34、CD45,几乎不表达内皮细胞表面标记物CD31;成骨诱导可见褐色矿化结节,茜素红染色呈阳性;成脂肪诱导后可见细胞中脂滴形成,油红O染色呈阳性。(2)建立hPDLSCs与PBMCs共培养体系后,运用qRT-PCR、Elisa分别检测hPDLSCs中免疫调节因子(TGF-β、IDO、IL-10)及PBMCs中炎性因子(TNF-α、IFN-γ、IL-1α)的变化。发现与对照组相比,免疫调节因子mRNA及蛋白的表达量均显著升高(P<0.01);炎性因子mRNA及蛋白的表达量均降低(P<0.01 或 P<0.05)。(3)将 miR-17 的 mimics(pre-miR-17)、inhibitor(anti-miR-17)及无关序列对照的模拟物分别转染到hPDLSCs中后,通过real-time PCR检测48h后hPDLSCs中miR-17的表达量,发现空白对照组与无关序列对照组无统计学差异(P>0.05),排除转染试剂对本实验的干扰。此外,将转染后的hPDLSCs分别与活化的PBMCs建立Transwell共培养体系,共培养48h后通过qRT-PCR、Western blot和Elisa三种方法分别检测共培养体系中各组中免疫调节因子(TGF-β、IDO、IL-10)mRNA及蛋白的表达,发现过表达组与过表达对照组相比,免疫调节因子的表达均显著升高(P<0.01或P<0.05);而抑制组与抑制对照组相比,这些因子的表达均降低(P<0.01或尸<0.05)。(4)共培养48h后通过流式细胞术检测hPDLSCs的增殖及凋亡,发现过表达组与过表达对照组相比,增殖指数升高(P<0.01),凋亡率降低(P<0.01);抑制组与抑制对照组相比,增殖指数降低(P<0.01),凋亡率升高(P<0.05)。[结论](1)有限稀释法多克隆法培养的hPDLSCs具备干细胞较强的自我更新能力和多向分化潜能。(2)hPDLSCs具备显著的免疫调节特性,能通过分泌可溶性免疫调节因子发挥免疫调节作用。(3)miR-17能调控hPDLSCs免疫调节特性。其通过促进hPDLSCs分泌可溶性免疫调节因子参与免疫调节。(4)miR-17能调控hPDLSCs的增殖与凋亡,能促进其增殖并抑制其凋亡。