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实验目的
转化生长因子β1(Transfoyminggrowthfactoβ1,TGF-β1)是肝纤维化形成中重要的细胞因子,体内多种细胞如淋巴细胞、血小板、巨噬细胞等均可合成与分泌TGF-β1。目前已明确肝纤维化时细胞外基质(Hepaticextracel-lularmatrix,ECM)的合成与分泌主要由TGF-β1介导,TGF-β1是强效致纤维化因子。目前国内关于血浆TGF-β1检测与肝纤维化的研究较少,且评价不一。
研究目的
观察慢性病毒性肝炎患者不同时期血浆TGF-β1水平及肝胶原含量,探讨TGF-β1与肝纤维化分期的关系。
实验方法
1.病例选择选择2004年6月-2005年4月住院的慢性乙型肝炎患者89例,所有病例经肝组织病理确诊,诊断符合2000年全国病毒性肝炎防治方案慢性肝炎炎症分级(Grade,G)、纤维化分期(Stage,S)标准,并选健康体检正常者16例做为正常对照。
2.血浆TGF-β1检测于肝穿活检前3天内空腹抽血,肝素钠抗凝,离心,分离新鲜血浆,-20度冰冻保存,采用双抗体夹心ELISA法检测TGF-β1水平。
3.病理制片及分析B超定位下肝活检,采取负压吸引法,肝穿标本以10%甲醛固定,石蜡包埋,连续切片,常规HE染色、并做Masson三色染色及Gordon-Sweets浸银染色,光镜下观察汇管区、肝小叶和中央静脉等结构并进行综合判断,做出炎症分级(G:0-4)及纤维化分期(S:0-4)的诊断,采用多媒体图像系统对Masson染色标本进行胶原定量测定,分析慢性病毒性肝炎患者纤维化各期血浆TGF-β1水平及与胶原纤维量的相关性。
4.统计学方法t检验、直线相关分析.
实验结果
慢性病毒性肝炎患者血浆TGF-β1(ng/ml)水平显著高于正常血浆对照组(4.8±2.1,p<0.01),TGF-β1水平随纤维化分期从S0-S4逐步升高(9.1±2.7,11.8±2.9,,16.1±4.9,21.2±6.0,27.0±6.8),不同纤维化分期间差异显著(p<0.01),TGF-β1水平与肝组织胶原含量呈正相关(r=0.756,p<0.01)。但肝组织不同炎症分级间TGF-β1水平差异无差异(18.7±7.0,16.8±9.1,17.7±8.6,18.9±6.2,p>0.05),二者无相关性(P>0.05)。
结论
慢型病毒性肝炎患者血浆TGF-β1水平显著高于正常人,并随纤维化分期S0-S4逐步升高,与肝组织纤维化程度相关。