间日疟原虫感染免疫应答特征的研究

来源 :蚌埠医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yjcog
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目的:  (1)了解间日疟原虫现症感染者外周血细胞免疫表型变化特征;  (2)观察间日疟原虫抗原诱导的间日疟原虫现症感染者PBMC的增殖和凋亡;  (3)了解IFN-γ、TGF-β1在间日疟原虫感染免疫中的作用;  (4)探讨间日疟原虫感染引起的抗间日疟原虫粗制抗原(P.vAg)、抗P.vMSP-1(19)、抗P.vAMA-1、抗恶性疟原虫粗制抗原(P.fAg)、及抗正常红细胞膜抗原(NRBCAg)IgG抗体水平变化特征。  方法:  (1)用流式细胞仪检测44例间日疟原虫现症感染者(AC组)、18例既往感染者(IC组)、24例正常对照(NC组)外周血CD3+CD4+T细胞、CD3+CD8+T细胞、γδT细胞、B细胞、NK细胞、NKT细胞、CD4+记忆性 T细胞(CD4+CD45RO+T),早期CD4+记忆性T细胞(CD4+CD45RO+CD27+T),CD8+T记忆性细胞(CD8+CD45RO+T),早期 CD8+记忆性 T细胞(CD8+CD45RO+CD27+T),CD4+CD25+T细胞及其表达FoxP3细胞的百分含量;  (2)利用3H-TdR掺入法观察5例间日疟原虫现症感染者PBMC在间日疟发病时(week0)、发病后第1周(week1)、发病后第2周(week2)与P.vAg、P.fAg、NRBCAg及 OKT3共培养时增殖活性的动态变化;  (3)用 Annexin-V-FITC与CD3-APC、CD4-PECy5.5、CD8-PE、CD19-PECy5.5单克隆抗体联合使用测定7例疟原虫现症感染者 PBMC与 PvAg和 NRBCAg共培养时 CD3+CD4+T细胞、CD3+CD8+T细胞及B细胞凋亡的百分率;  (4)用ELISA法检测30例间日疟原虫现症感染者及15例正常对照血浆IFN-γ、TGF-β1水平,同时检测12例间日疟原虫现症感染者及6例正常对照人群PBMC与P.vAg、NRBCAg及OKT3共培养时上清中IFN-γ、TGF-β1水平。此外,观察了5例间日疟原虫现症感染者PBMC在week0、week1、week2与P.vAg、P.fAg、NRBCAg及OKT3共培养时上清中IFN-γ、TGF-β1水平;  (5)采用ELISA法测定77例疟原虫现症感染者、32例既往感染者、20例正常人群血浆抗P.vAg、抗P.vMSP-1(19)、抗P.vAMA-1、抗P.fAg、及抗NRBCAgIgG抗体水平。  结果:  (1)AC组、IC组及NC组外周血细胞免疫表型:AC组NK、NKT及CD8+T细胞百分含量(分别为9.87%、3.11%及24.46%)明显低于IC组(16.70%、4.68%及28.92%)及NC组(14.37%、4.43%及30.77%)(P均<0.05);但AC组γδT、CD4+记忆性T、CD8+记忆性T及CD4+CD25+T细胞百分含量(4.79%、25.13%、18.52%及4.83%)明显高于IC组(3.04%、20.00%、13.48%及3.16%)及NC组(3.29%、16.60%、13.27%及2.41%)(P均<0.05);AC组早期CD4+记忆性T及早期 CD8+记忆性 T细胞百分含量(77.85%及79.67%)亦明显高于 NC组(63.60%及59.46%)(P均<0.05);AC组CD4+T细胞、CD4+CD25+FoxP3+T细胞与 B细胞的百分含量与 IC组及 NC组相比,差异无显著性(P均>0.05);  (2)间日疟原虫现症感染者 PBMC体外增殖的动态变化:AC组 P.vAg刺激孔PBMC在发病时的CPM值明显高于发病后1周及发病后2周(P均<0.05),且在发病时和在发病后2周,AC组P.vAg刺激孔的CPM值明显高于NRBCAg刺激孔及P.fAg刺激孔(P均<0.05);而在发病后1周,AC组P.vAg刺激孔的CPM值与NRBCAg刺激孔及P.fAg刺激孔之间差异无显著性(P均>0.05);  (3)间日疟原虫现症感染者 PBMC细胞亚群的凋亡:间日疟原虫现症感染者外周血CD3+CD8+T细胞 P.vAg刺激孔的凋亡率(55.16%)明显高于 NRBCAg刺激孔(16.30%)及空白孔(22.86%)(P均<0.05),而 B细胞与CD3+CD4+T细胞P.vAg刺激的凋亡率虽高于NRBCAg刺激孔及空白孔,但差异无显著性(P均>0.05);  (4)血浆/PBMC培养上清IFN-γ及TGF-β1水平:AC组血浆IFN-γOD值明显高于NC组(P<0.01),且在发病时AC组血浆IFN-γOD值明显高于发病后1周及发病后2周(P均<0.05),但在发病后1周与发病后2周AC组血浆IFN-γOD值无显著性差异(P均>0.05);AC组以PvAg刺激的PBMC培养上清IFN-γOD值明显高于 NC组(P<0.01),且在发病时以 P.vAg刺激的PBMC培养上清IFN-γOD值明显高于发病后1周及2周(P均<0.05);而AC组与NC组血浆及各刺激孔PBMC培养上清TGF-β1OD值之间差异无显著性(P均>0.05);此外AC组血浆及各刺激孔PBMC培养上清TGF-β1OD值在发病时、发病后1周及发病后2周皆无显著性差异(P均>0.05);  (5)AC组、IC组及NC组血浆IgG抗体水平:AC组血浆抗P.vAg、P.vMSP-1、P.vAMA-1及P.fAg IgG抗体OD值明显高于 IC组及NC组(P均<0.05);此外,IC组血浆抗P.vAg及P.vAMA-1IgG抗体OD值亦明显高于NC组(P均<0.05);AC组与IC组血浆抗NRBCAgIgG抗体OD值均显著高于NC组(P均<0.05),但AC与IC两组之间无显著性差异(P均>0.05)。  结论:  (1)间日疟原虫现症感染者外周血各细胞亚群的百分含量发生了明显变化,但各细胞亚群的变化不同;间日疟原虫感染时初始CD4+T及CD8+T细胞可被激活并分化为记忆性 T细胞;CD4+CD25+T细胞百分含量明显升高,但其中表达FoxP3细胞群体的百分含量却未见明显升高;  (2)P.vAg可增强间日疟原虫现症感染者PBMC的增殖反应,而这种增殖反应在抗疟治疗后显著降低;同时P.vAg可诱导间日疟原虫现症感染者CD3+CD8+T细胞凋亡;  (3)间日疟原虫现症感染者血浆不仅具有高水平抗间日疟原虫全虫抗原的IgG抗体,而且具有高水平抗重组抗原 P.vMSP-1(19)及 P.vAMA-1的IgG抗体,间日疟原虫感染所诱导的IgG抗体与 P.fAg有交叉反应;此外,间日疟原虫感染可诱导宿主产生抗正常红细胞膜抗体;  (4)在急性感染阶段IFN-γ可参与机体针对间日疟原虫的细胞免疫应答,而TGF-β1水平在间日疟原虫感染进程中未发生明显变化。
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