猪抑制素α亚基重组融合蛋白的制备及应用研究

来源 :华南农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:UltraSparc
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
家畜的繁殖性能是畜牧业中衡量家畜生产性能的一个重要指标,家畜的繁殖力主要由下丘脑一垂体一性腺轴精确调控。抑制素是家畜下丘脑一垂体一性腺轴调控系统的一种重要的水溶性糖蛋白激素,主要由雄性动物的睾丸支持细胞和雌性动物的卵泡颗粒细胞分泌。应用抑制素进行主动或被动免疫家畜可以打破家畜生殖内分泌激素间的动态平衡,中和内源性类固醇激素或抑制素,解除其对FS}t分泌的负反馈抑制作用,调控家畜的繁殖活动。本研究应用RT—PCR技术扩增了蓝塘猪抑制素α亚基基因编码区全长,并将其成熟肽基因进行了克隆、表达,表达蛋白纯化后免疫家畜,通过观察家畜繁殖性能发生的改变及其产生的抑制素抗体滴度和体内相应激素水平的检测,进一步探索研究了抑制素重组融合蛋白免疫对家畜繁殖活动的调控作用。 本研究利用RT—PCR技术克隆了蓝塘猪抑制素α亚基基因编码区序列,全长1095bp,含完整的抑制素α亚基基因编码区序列,编码364个氨基酸残基。Blast分析显示与6enbank登陆号NM_214189的序列相比,共有8处核苷酸改变(G19lA,G269A,A359G,G417A,C457T,A465G,A501G,G510A),其中3处导致了氨基酸改变(G1y64Glu,Arg∞ms,ms120Arg),核苷酸序列的同源性达99.3%,氨基酸同源性为98.9%,而成熟肽部分的核苷酸序列完全相同。将蓝塘猪抑制素α亚基成熟肽的cDNA插入到T7启动子控制下的高效表达载体pRSETA的BglⅡ和EcoRⅠ两个位点之间,构建了猪抑制素α亚基成熟肽的重组表达质粒pR—IM。重组质粒pR一IM在£coJiBL21(DE3)中以包涵体的形式表达了175个氨基酸残基的抑制素α亚基重组融合蛋白,表达蛋白经0.05mMIPTG诱导5小时之后表达量达到最高,大约占总菌体蛋白的32%左右。并且表达产物可以经50%№一NTA凝胶纯化,利用兔抗牛α抑制素抗体对重组质粒pR~IM所表达的重组蛋白进行Westernblot分析,能被兔抗牛一抑制素抗体识别,表明成功获得了猪抑制素α亚基成熟肽融合蛋白。在此基础上,本研究大量表达猪抑制素α亚基成熟肽融合蛋白并制备了猪抑制素α亚基成熟肽融合蛋白油乳剂疫苗。 本研究应用主动免疫猪抑制素α亚基成熟肽重组融合蛋白疫苗主动免疫成年种公猪和后备母猪,观察成年种公猪精子活力和精子密度的变化以及后备母猪初情期的长短,检测体内相应的抗体水平和激素变化,进一步研究了主动免疫猪抑制素α亚基成熟肽重组融合蛋白对种猪生产性能的影响。对杜洛克2岁公猪主动免疫猪抑制素α亚基成熟肽重组融合蛋白疫苗后能产生高水平的抗抑制素抗体,在整个试验阶段,对照组没有产生抗抑制素抗体。在首免60天后到试验结束时的150天,免疫组公猪的精子密度显著上升,与对照组相比,差异显著(P
其他文献
本研究旨在通过动物饲养试验、屠宰试验并结合体外细胞培养试验,研究硒代蛋氨酸(Se—Met)对肥育猪抗氧化能力和猪肉品质的影响及其作用机理,为Se—Met在养猪生产中的应用提供科
冶金部北京有色冶金设计院和南京凤凰山铁矿“三结合”小组,于1977年底研制成功新型低频翻笼矿车清扫器(图1),安装在凤凰山铁矿选厂1号生产翻笼上(直径为3.0米圆筒式翻笼,1.
甜菊新品种中品一号甜菊是最近引起世界重视的天然糖料之一,叶中含有糖甙,甜度为蔗糖的150~300倍,是高甜度、低热能、味质好,对人体健康有益的安全糖源,可代替糖精或部分蔗糖
根据江苏省铁矿资源贫、矿山小而且分散的特点,自1971年起,我省一些矿山及钢铁厂相继办起了小选厂。到目前为止,已有9个选厂投入了生产,有2个选厂在设计或施工中。投产的小
本钢南芬选厂在北京矿冶研究院设备室的大力协助下,在取得螺旋溜槽单机回收尾矿试验成果的基础上,今年安装了22台,于1978年4月至6月进行了连续性的扩大工业试验。试验采用的
梁外甘草甘草,含有甘草甜素(甘草酸的钾钙盐),甘草苦素,甘草甙,蔗糖、葡萄糖、天冬素等多种成份。入药味甘性平,补脾益气,润肺止咳,清热解毒,调和诸药,素有“中草药之王”的美称。现代医
一、豆腥味的产生因子,脂肪氧化酶欠缺的遗传基因的发现大豆在食品加工上有良好的功能特性,是优良的食品素材。然而,由于种子中脂肪氧化酶的作用,使脂肪氧化而产生豆腥味。
一、概述我矿斜井人车绞车及整套电控设备均为加拿大进口的。1956年安装投产至今仍然担负全矿运送人员的繁重任务。原绞车的起动采用七段加速接触器,金属(铸铁)转子电阻,前
本研究的目的是通过消化代谢试验和饲养试验来评定膨化玉米的营养价值及对断奶仔猪生产性能的影响,为丰富饲料原料基础数据库和配制高品质的仔猪饲料提供理论依据和实用参考。
籽料重量; 在这二年中,记录中的籽粒产量有很大差别,这是因为所采用品种不同。品种Cm206自交系,潜在产量很低,所以1988—1989这一季玉米产量几乎是第二年的一半。对二年产量