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【目的】观察脾肾双补方含药血清对离体人早孕绒毛滋养细胞(HTR-8)的活力、细胞总数、妊早期免疫相关因子HCG、HLA-G、HPL的含量以及调控滋养细胞侵袭的相关蛋白p38MAPK、MMP-2及TIMP-2表达水平的影响,初步探讨脾肾双补方经p38MAPK-MMPs/TIMPs级联信号通路调控滋养细胞侵袭活力以及抑制母体排异反应的免疫因子以维持妊娠的作用机理。【方法】将80只SPF级雌性SD大鼠随机分为8组:脾肾双补方高、中、低剂量组、滋肾育胎丸高、中、低剂量组、地屈孕酮组和空白对照组,每组各10只。各组分别给予相应的灌胃液灌胃。连续给药7d,末次给药12h后行股动脉采血,制备含药血清。将HTR-8细胞置于各组含药血清培养基中培养24h、36h、48h,培养的上清液采用ELISA法测定HCG、HPL的含量。培养48h的细胞悬液用台盼蓝法测定细胞活力,其后的细胞制作细胞块切片,HE染色观察离体滋养层细胞HTR-8的数目,免疫组化SP法染色半定量检测HLA-G、p38MAPK、MMP-2、TIMP-2的表达水平。【结果】1.脾肾双补方大鼠含药血清对离体的HTR-8细胞相关免疫因子HPL、HCG、HLA-G表达的影响地屈孕酮组、脾肾双补方组(高、中剂量)和滋肾育胎丸组(高、中剂量)24h、36h、48h的HCG、HPL的含量都明显高于空白组,差异有统计学意义(P<0.05)。脾肾双补方低剂量组36h、48h的HCG含量和滋肾育胎丸低剂量组48h的HCG含量高于空白组(P<0.05)。与空白组比较,地屈孕酮组、脾肾双补方(高、中、低剂量)组和滋肾育胎丸(高、中剂量)组能显著提高HLA-G的表达水平(P<0.05)。脾肾双补方高剂量组HLA-G的表达水平比脾肾双补方中、低剂量组增高(P<0.05)。脾肾双补方高剂量组HLA-G的表达水平高于滋肾育胎丸高剂量组(P<0.05)。脾肾双补方低剂量组HLA-G的表达水平高于空白组和滋肾育胎丸低剂量组(P<0.05)。2.脾肾双补方含药血清对离体的HTR-8细胞总数和细胞活力的影响与空白组比较,地屈孕酮组、脾肾双补方高、中剂量组和滋肾育胎丸(高、中剂量)组能显著提高HTR-8细胞总数、细胞分裂数和细胞活力,降低凋亡数(P<0.05)。脾肾双补方低剂量组和滋肾育胎丸低剂量组HTR-8的细胞活力高于空白组(P<0.05)。脾肾双补方高剂量组细胞活力比脾肾双补方中剂量组细胞活力增高(P<0.05)。脾肾双补方高剂量组HTR-8细胞活力高于滋肾育胎丸高剂量组(P<0.05)。脾肾双补方低剂量组HTR-8细胞活力高于滋肾育胎丸低剂量组(P<0.05)。3.脾肾双补方大鼠含药血清对离体的HTR-8细胞p38MAPK表达的影响与空白组比较,地屈孕酮组、脾肾双补方(高、中、低剂量)组和滋肾育胎丸(高、中、低剂量)组能显著提高p38MAPK的表达水平(P<0.05)。脾肾双补方高剂量组p38MAPK的表达水平高于脾肾双补方中剂量组(P<0.05)。脾肾双补方高剂量组p38MAPK的表达水平高于滋肾育胎丸高剂量组(P<0.05)。4.脾肾双补方大鼠含药血清对离体的HTR-8细胞侵袭调节蛋白酶MMP-2、TIMP-2及其比值表达的影响与空白组比较,地屈孕酮组、脾肾双补方(高、中剂量)组能提高MMP-2、TIMP-2的表达水平(P<0.05)。脾肾双补方高剂量组MMP-2、TIMP-2的表达水平高于脾肾双补方(中、低剂量)组(P<0.05)。地屈孕酮组、脾肾双补方组(高、中剂量)和滋肾育胎丸组(高、中剂量)的MMP-2/TIMP-2的比值均接近于1,但以脾肾双补方高剂量组的MMP-2/TIMP-2比值最接近1。5.HTR-8细胞的侵袭活力和相关免疫因子与p38MAPK级联信号通路的相关性分析各组HTR-8细胞p38MAPK的表达与MMP-2、TIMP-2、MMP-2/TIMP-2的表达水平均呈直线正相关。p38MAPK的表达与细胞总数、细胞活力、HLA-G的表达、HCG和HPL的含量均呈线性正相关。【结论】脾肾双补方可以促进人早孕绒毛滋养细胞的增殖,减少凋亡,提高滋养细胞活力,促进滋养细胞正常侵袭,从而提高妊娠成功率,维持正常妊娠,其机制可能是通过p38MAPK-MMP2/TIMP2级联信号通路调控滋养细胞的侵袭活力,促进滋养细胞分泌HCG、HPL,提高滋养细胞中HLA-G的表达,抑制母体排异反应,调节MMP-2/TIMP-2的比值,以维持早期妊娠。