目的 1.硫熏对浙贝母中总生物碱、总皂苷及水煎液pH值的影响研究;2.建立硫熏、鲜切浙贝母中水溶性成分的指纹图谱、聚类分析及主成分分析(principal component analysis PCA)研究;3.硫熏对浙贝母中水溶性成分含量的影响研究;4.硫熏对浙贝母中挥发油成分的影响研究;5.硫熏对浙贝母镇咳、祛痰、抗炎作用及毒性的影响研究;6.硫熏对浙贝母中贝母素甲、贝母素乙的体内药代动力学研究。方法1.采用UV显色法、重量法及pH计测定法考察硫熏对浙贝母中总生物碱、总皂苷含量及水煎液pH值的影响。2.取硫熏、鲜切浙贝母样品各13批,利用HPLC-DAD法,建立硫熏、鲜切浙贝母中水溶性成分的指纹图谱,利用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版》计算相似度,建立其共有模式;并利用SPSS 19.0软件与SIMCA-P 11.5软件对硫熏、鲜切浙贝母水溶性成分指纹图谱进行聚类分析、主成分分析(PCA)。3.取硫熏、鲜切浙贝母样品各13批,利用HPLC-DAD法,考察硫熏对浙贝母中水溶性成分的含量影响。4.采用水蒸汽法提取硫熏、鲜切浙贝母中挥发油成分,利用GC-MS法,考察硫熏对浙贝母中挥发油成分的影响。5.采用小鼠氨水引咳法、小鼠酚红排泌法、二甲苯致小鼠耳肿胀法及急性毒性实验考察硫熏对浙贝母镇咳作用、祛痰作用、抗炎作用及毒性的影响。6.利用LC-MS法考察硫熏对浙贝母中贝母素甲、贝母素乙的体内药代动力学的影响。结果1.测得硫熏、鲜切浙贝母中总生物碱的平均含量分别为0.0629%、0.0727%;其总皂苷的平均含量分别为0.8567%、2.3157%;其水煎液pH的平均值分别为4.14、5.92。2.硫熏浙贝母水溶性成分的指纹图谱中有25个共有色谱峰,其中7、9、13、16、20、24、25号峰分别为腺嘌呤、肌苷、尿嘧啶、尿苷、β-胸苷、腺苷、2-脱氧腺苷;鲜切浙贝母水溶性成分的指纹图谱中有25个共有色谱峰,其中7、8、11、14、18、20、24、25号峰分别为腺嘌呤、胞嘧啶核苷、肌苷、尿嘧啶、尿苷、β-胸苷、腺苷、2-脱氧腺苷;对不同产地及批次的浙贝母水溶性成分指纹图谱进行了相似度比较,其相似度达到了 0.95以上,对上述指纹图谱进行聚类分析与主成分分析(PCA),鉴别出了硫熏浙贝母样品与鲜切浙贝母样品及两者的差异。3.对硫熏、鲜切浙贝母中水溶性成分的指纹谱图进行定性比较,在相同的保留时间内,其色谱峰面积有不同程度的变化。在硫熏浙贝母水溶性成分色谱图中腺嘌呤、胞嘧啶核苷、肌苷、尿嘧啶、腺苷、2-脱氧腺苷的峰面积降低,而尿苷、β-胸苷的峰面积升高;所测不同产地及批次硫熏、鲜切浙贝母中水溶性成分腺嘌呤的平均含量分别为0.0050%、0.0218%,胞嘧啶核苷的平均含量分别为未测出、0.1222%,肌苷的平均含量分别为0.0913%、0.2610%,尿嘧啶的平均含量分别为0.0046%、0.0282%,尿苷的平均含量分别为0.0576%、0.0242%,β-胸苷的平均含量分别为0.1398%、0.1001%,腺苷的平均含量分别为0.2381%、0.3593%,2-脱氧腺苷的平均含量分别为0.0360%、0.0786%。4.从硫熏浙贝母挥发油成分中鉴定出13种成分,主要成分相对百分含量为L-(+)-抗坏血酸2,6-棕榈酸酯(27.06%),3-甲烯基-雄甾烷17-醇(20.50%),(8β,13β)16-贝壳杉烯(10.76%)和(Z,Z)十八碳二烯酸(10.07%);鲜切浙贝母挥发油成分中鉴定出15种成分,主要成分相对百分含量为亚油酸乙酯(36.93%),16-贝壳杉烯(22.85%),十六酸乙酯(10.67%)和3-甲烯基-雄甾烷17-醇(10.59%)。5.药理学实验结果表明,与阴性对照组相比,硫熏浙贝母水煎液在1.5g/kg,3g/kg剂量下均具有明显的镇咳、祛痰作用(P<0.05,P<0.01),在0.75g/kg,1.5g/kg,3g/kg剂量下具有明显的抗炎作用(P<0.01);鲜切浙贝母水煎液在0.75g/kg,1.5g/kg,3g/kg剂量组下均具有明显的镇咳、祛痰及其抗炎作用(P<0.05,P<0.01)。而硫熏浙贝母水煎液组与鲜切浙贝母水煎液组相比,在0.75g/kg,1.5g/kg,3g/kg剂量下其镇咳、祛痰及其抗炎作用未有明显的差异性(P>0.05)。硫熏、鲜切浙贝母提取物半数致死量未求得,硫熏浙贝母提取物对小鼠的最大耐受量为68.00g生药/kg,鲜切浙贝母提取物对小鼠的最大耐受量为51.37g生药/kg;硫熏、鲜切浙贝母提取物组小鼠的体重与阴性对照组比较均无显著性差异(P>0.05),解剖后肉眼观察心、肝、脾、肺、肾等器官未发现明显异常。6.大鼠灌胃硫熏、鲜切浙贝母提取物后,其主要药代动力学参数显示,硫熏、鲜切浙贝母提取物中贝母素甲最大血药浓度(Cmax)分别为66.40±4.65 ng/mL、186.37±18.82 ng/mL,其药时曲线下面积(AUC)分别为 181.79±7.85(ng/mL)h、197.70±18.69(ng/mL)h;而硫熏、鲜切浙贝母提取物中贝母素乙最大血药浓度(Cmax)分别为146.72±10.88 ng/mL、227.65±7.01 ng/mL,其药时曲线下面积(AUC)分别为 457.38±58.81(ng/mL)h、566.16±41.55(ng/mL)h。结论1.硫熏在一定程度上降低了浙贝母中总生物碱、总皂苷的含量,且水煎液pH值更偏酸性。2.建立的硫熏、鲜切浙贝母水溶性成分的指纹图谱研究、聚类分析与主成分分析(PCA)的方法是对浙贝母质量控制的一种有效手段。3.硫熏对浙贝母中水溶性成分含量的影响不一,其腺嘌呤、胞嘧啶核苷、肌苷、尿嘧啶、腺苷、2-脱氧腺苷的含量降低,而尿苷、β-胸苷的含量却升高。4.硫熏改变了浙贝母中挥发油成分的组成及其相对百分含量。5.硫熏对浙贝母镇咳、祛痰、抗炎的药理作用有一定的影响;毒性研究表明,硫熏浙贝母水溶性提取物的毒性极低,且硫熏提高了浙贝母水溶性提取物的最大耐受量。6.硫熏降低了浙贝母中贝母素甲、贝母素乙在大鼠体内的最大血药浓度(Cmax)及药时曲线下面积(AUC)。