恶性淋巴瘤起源于正常的淋巴细胞，所有的B淋巴细胞表面都表达特异的独特型免疫球蛋白抗原(IdiotypeId)，而且这种抗原具有自身免疫原性。当淋巴细胞恶变时，其表面的Id仍保持其原有的特性。由于肿瘤往往是单克隆起源的，B细胞淋巴瘤表面均表达单克隆的Id抗原，因此Id是B细胞淋巴瘤一个特异性较强的治疗靶点。 　　本研究试图通过小鼠体外实验证明与细胞穿透肽(CPP)结合的独特型(Id)抗原的CTL表位肽(CPP-Id)负载树突状细胞(DC)可以增加Id进入DC的量，提高DC提呈Id抗原的效率，从而增强DC刺激CTL活化，提高其增殖率和对特异性肿瘤细胞的杀伤率；同时在淋巴瘤动物模型上证明CPP-Id可提高DC疫苗的免疫治疗效果及特异性免疫保护功能。 　　第一部分CPP-Id对小鼠DC表面共刺激分子表达的影响目的：首先确定小鼠淋巴瘤细胞株A20中Id-CTL表位的存在，其次了解CPP-Id进入DC的量，在细胞内的分布和进入细胞的时相，同时检测其对DC表面标志表达的影响。方法：用RT-PCR方法扩增A20细胞株的Id抗原CTL表位的基因片段，并测序确定氨基酸的序列；通过流式细胞仪检测CPP-Id与Id进入小鼠DC的量的差异及抗原负载前后的DC表型的表达；共聚焦显微镜观察CPP-Id进入细胞的过程及时间；荧光显微镜观察CPP-Id在细胞内的分布。结果：RT-PCR扩增产物为660bp的片段，测序结果表明A20细胞株的Id抗原CTL表位的基因存在。共聚焦显微镜检测显示CPP-Id能在最初200秒时间内快速进入DC，单纯Id进入DC的量很少。10uM的CPP-Id负载的DC细胞平均荧光强度(MFI)高于单独使用Id组(4.35±0.48vs1.14±0.33，p＜0.005)；两者负载的DC表面标记CD80、CD86、CD54及MHCⅠ、Ⅱ类分子表达均比未成熟DC明显增加。结论：实验表明CPP-Id比Id进入小鼠DC的量明显增加，CPP肽可以提高Id抗原进入细胞的效率；CPP-Id体外冲击DC后，可以使DC表面MHC-Ⅰ、Ⅱ类分子，协同刺激分子CD80、CD86以及粘附分子CD54表达显著增高，有利于活化CTL。 　　第二部分CPP-Id体外刺激CTL增殖及杀伤功能的研究目的：通过体外检测不同抗原负载的DC刺激小鼠TC的增殖、诱导肿瘤特异性CTL分泌INF-γ的量以及对A20细胞的杀伤实验，了解DC体外活化TC的效应。方法：混和淋巴细胞反应(MLR)用MTT法检测不同抗原负载后的DC体外刺激同种异体淋巴细胞的增殖率；LDH法检测不同抗原负载后的DC诱导同种异体CTL的特异性杀伤活性；ELISPOT法检测活化的TC分泌INF-γ的能力。结果：CPP-Id负载后的DC能较强的诱导同种异体T淋巴细胞的增殖反应能力，在各浓度的效靶比均对野生型A20细胞株的杀伤能力明显增强，与Id负载的DC相比p＜0.05。结论：CPP-Id体外冲击DC后，可以诱导CTL的增殖及杀伤活性增强。第三部分CPP-Id-DC疫苗抗肿瘤免疫治疗与免疫保护的体内实验目的：通过在淋巴瘤动物模型上接种不同抗原负载的DC疫苗，了解疫苗对荷瘤鼠的免疫治疗作用及疫苗免疫小鼠对肿瘤攻击的免疫保护效应。方法：将1×106个A20细胞接种到BALB/c小鼠皮下，建立荷瘤鼠模型，分别接种不同的DC疫苗，观察荷瘤鼠肿瘤大小变化及生存时间；将预先用DC疫苗免疫的小鼠用A20细胞攻击，观察成瘤率及生存时间。结果：用PBS接种的荷瘤鼠肿瘤生长快，中位生存时间33.4天；用工d-DC接种的荷瘤鼠，个别小鼠肿瘤生长减慢，中位生存时间40.4天；与对照组相比无显著性差异。而用CPP-Id-DC接种的荷瘤鼠的肿瘤生长明显减慢，1/5小鼠肿瘤停止生长，1/5小鼠肿瘤逐渐缩小、消退，90天内的中位生存时间为70.8天，明显长于前2组的生存时间(＜0.001)。用Id-DC预防接种的小鼠予A20细胞攻击后大部分成瘤(4/5)，成瘤时间在7～12天，较对照组略延长，观察60天有1/5存活，中位生存时间为44.8天；CPP-Id-DC接种组的小鼠60天内均无肿瘤生长。结论：CPP-Id体外冲击DC的方法治疗B细胞淋巴瘤优于单纯Id负载DC免疫治疗方法，可以提高抑瘤率和延长荷瘤鼠生存时间；CPP-Id负载的DC疫苗可在小鼠体内产生对A20淋巴瘤细胞攻击的免疫保护。