【摘 要】
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精子特异性乳酸脱氢酶由4个C亚基组成,因此又称为乳酸脱氢酶C4（lactate dehydrogenase C4,LDH-C4）,特异性地存在于哺乳动物发育成熟的睾丸组织中,是精子能量代谢的一个关键酶,与精子的生成、代谢、获能等有密切关系。前期,我们在LDH-C4多态性与男性不育症关系的研究过程中,我们发现了一个截短突变:L178X。为了研究基因突变对LDH-C4结构和功能的影响,我们利用I-TA
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精子特异性乳酸脱氢酶由4个C亚基组成,因此又称为乳酸脱氢酶C4（lactate dehydrogenase C4,LDH-C4）,特异性地存在于哺乳动物发育成熟的睾丸组织中,是精子能量代谢的一个关键酶,与精子的生成、代谢、获能等有密切关系。前期,我们在LDH-C4多态性与男性不育症关系的研究过程中,我们发现了一个截短突变:L178X。为了研究基因突变对LDH-C4结构和功能的影响,我们利用I-TASSER等计算生物学方法对人LDH-C4的结构和功能进行预测,结果我们发现人LDH-C4和体细胞LDH属于LDH-1家族的成员,并且与体细胞LDH同享绝大部分保守位点。同时,我们找到LDH-1家族的3个基本特征:NAD结合位点、底物结合位点、亚基结合面氨基酸残基组成,为今后可能发现的更多LDHC基因突变对LDH-C4结构和活性的影响提供了参考依据。在此基础上,我们构建了人LDH-C4的L178X突变体原核表达载体pET-28a（+）-hLDHC/L178X,发现其诱导表达的产物没有活性,证明了我们前面的预测结果。我们还构建了人LDH-C4的L178X突变体真核表达载体pVAX1-hLDHC/L178X,进行体外转录/翻译实验,模拟杂合子、突变型纯合子、以及野生型纯合子3种状态下,LDH-C4活性的变化。结果发现野生型LDH-C4的活性约为突变型杂合子的两倍,本研究为全面阐明LDHC基因突变对LDH-C4功能的影响奠定了基础。
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