目的与背景：1、食管癌是人类常见的恶性肿瘤之一,Ahmed in Jemal等的报告显示,2008年全球新发癌症病例1270万中食管癌高居全球恶性肿瘤发病率的第8位,死亡率第6位；在发展中国家男女发病率约有26.6万和13.8万人,分别排在第5位和第8位,死亡率却男性高达22.3万,女性死于食管癌有11.6万,分别排在第4位和第7位。我国食管癌发病率为13/10万,尤其以太行山周边的河北、河南及山西广东的部分地区为高发地区。以往的研究发现,食管癌是遗传因素和环境因素综合作用的结果,对食管癌高发区的流行病学研究表明,食管癌发病具有一定的家族聚集性,在我国华北食管鳞状细胞癌高发区的人群中,存在着一个符合孟德尔隐性遗传规律主基因或主基因群,与该地区人群的食管鳞状细胞癌易感性有关；对环境因素的研究表明,诱发食管癌的危险因素包括饮食习惯、营养因素、微量元素和癌前病变等多方面作用。亚硝胺类化合物是公认的强致癌物,酸菜、腌制和发霉食物均含有亚硝胺类化合物和真菌毒素。食管癌包括鳞状细胞癌和腺癌,在我国食管癌以鳞状细胞癌(squamous cell carcinoma, SCC)为主,也有部分腺癌(adenocarcinoma, ADC)。人类食管癌是多步骤进展性的过程,食管上皮恶变的过程包括不典型增生、原位癌和晚期浸润癌。由于食管的特殊解剖部位,食管癌的早期诊断比较困难,通常患者出现症状后才就诊。因此,食管癌的治疗效果较差,其发病率接近死亡率。若在食管癌发生的早期发现病变并加以治疗,可大为提高生存率。所以研究关键基因在这一过程关键步骤中的表达改变不仅有助于理解食管癌癌变机理而且对食管癌的预防、早期诊断和治疗有重要的意义。随着分子生物学的发展,特别是近二十年来,人们对食管癌发病机制的认识得到了突飞猛进的发展,由过去单一的物理致癌、化学致癌、突变致癌学说上升到多步骤、多因素、多基因变异累积的综合致癌理论。分子生物学研究表明,肿瘤的发生、发展是多阶段、多基因参与、多种调控的过程,涉及一系列病理生理反应,包括细胞的异常增殖、黏附、运动、细胞外基质降解,血管生成等。目前已经开展很多关于食管癌形态学和临床病理特征的相关研究,但是到目前为止仍然没有找到一种具有临床实用价值的预测因子。如能很好的判断预后,对筛选高危病人及帮助制定个体化治疗方案大有裨益。2、酪氨酸蛋白激酶(protein tyrosine kinase, PTK)是一类催化ATP上γ-磷酸转移到蛋白酪氨酸残基上的激酶,能催化多种底物蛋白质酪氨酸残基磷酸化,在细胞生长、增殖、分化中具有重要作用。迄今发现的蛋白酪氨酸激酶中多数是属于致癌RNA病毒的癌基因产物,也可由脊椎动物的原癌基因产生。根据PTK是否存在于细胞膜受体可将其分成非受体型和膜受体型。非受体型以Src基因产物为代表,此外还有Yes、Fyn、Lck、Fgr、Lyn、Fps/Fes及Abl等。除后两者外,其余非受体型蛋白酪氨酸激酶Src家族分子量约为60kDa的蛋白质,它们之间除了N末端80个氨基酸组成不同外,其作部分都非常相似。膜受体型：根据它们的结构不同,受体型酪氨酸激酶可以分为9种类型,其中较常见的有4种类型,包括表皮生长因子受体(EGFR)家族、胰岛素受体家族、PDGF/MCSF/SCF受体家族、成纤维细胞生长因子受体(FGFR)家族。酪氨酸蛋白激酶-7(PTK7)是一种催化活性的受体酪氨酸激酶(RTK),它也被称为结肠癌激酶4(CCK4),是一个比较新,研究甚少的RTK家族的成员。它包含7个免疫球蛋白样环胞外域,跨膜结构域和催化活性的酪氨酸激酶域。PTK7在许多共同的人类恶性肿瘤中出现高表达,包括结肠癌,肺癌,胃癌和急性髓细胞白血病。目前已知PTK7作为PTK7/0tk的一个多功能的共同受体,参与Wnt、Semaphorin/Plexin和血管内皮生长因子所介导的信号传导通路中起到分子开关功能。众所周知Wnt信号通路是广泛存在于多细胞真核生物中的一条高度保守的信号通路,在胚胎发育过程中起到重要作用,而且与许多人类肿瘤的发生发展也具有密切关系。在Wnt信号途径之间的选择是由Fz的共同受体的存在。LRP6的激活经典Wnt通路,而PTK7和ROR激活非经典Wnt通路,PTK7有利于β-catenin的稳定性和转录活性,从而促进肿瘤的生长。而且在Semaphorin/Plexin和血管内皮生长因子(VEGF)信号通路起重要作用；PTK7/Otk参与Semaphorin/Plexin和血管内皮生长因子信号通路的共同受体功能。在PTK7参与下,PlexinAl与血管内皮生长因子-2形成一个可以抑制或刺激细胞迁移起调节作用；PTK7/血管内皮生长因子一1可以促进肿瘤血管内皮细胞迁移和血管形成。Shin WS利用能溶解PTK7的sPTK7中和内源性PTK7,从而抑制血管内皮生长因子(VEGF)诱导管形成、迁移,实验证明PTK7对血管形成,迁移和血管内皮细胞的入侵,而且在血管生成中起着重要的作用。wnt信号通路及Semaphorin/Plexin因子及血管内皮生长因子所介导的传导通路均参与了食管鳞状细胞癌的发生发展、侵袭、转移。所以食管鳞状细胞癌的表达可能与以上三条信息传导通路有关。目的：本研究应用PTK7(protein tyrosine kinase7)蛋白在食管鳞状细胞癌、癌旁组织中表达及与食管鳞状细胞癌的发展、侵袭、淋巴结转移的关系,PTK7表达与临床之间的关系,分析其在食管鳞癌中的诊断价值及预后变化。材料与方法：1、对象的选择、组织样本的采集与资料的收集,选取广东省揭阳市人民医院肿瘤中心从2003年1月份至2006年12月份的成年食管鳞状细胞癌手术患者作为研究对象,进行电话随访416例,并收集病人的性别、年龄、家族史、淋巴结转移、病理类型、肿瘤位置、肿瘤大小、病理分级、浸润深度以及临床分期等方面的资料,用于统计分析和研究。符合研究条件的患者食管癌原发灶80例及其匹配的正常食管组织标本(经病理学鉴定)63例。其中男性59例,女性21例,年龄41-78岁,全部患者术前均未经过放化疗。并取其病理标本。2、PTK7蛋白水平的测定采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结(streptavidin-perosidase, SP)法检测其中PTK7蛋白的表达,标本取材后以10%福尔马林固定,制作蜡块并切片3张,分别行HE染色复查诊断和组织学分级、免疫组织化学染色检测PTK7蛋白的表达。细胞浆和/或细胞核中出现棕黄色颗粒的细胞为阳性细胞。随机观察1000个癌细胞,PTK7染色结果的判断标准：细胞质内出现弥漫分布的棕黄色颗粒为阳性,按染色强度和阳性细胞数,计数阳性细胞染色程度及阳性细胞百分比,综合评分来判定阳性和阴性。3、生存分析2003年1月份至2006年12月份期间,对研究对象进行随访。患者手术治疗作为生存的起始事件,随访时间作为观察的终止时刻,以死亡作为终点事件,终点事件与起始事件之间的时间间隔定义为患者的生存时间。4、统计学分析运用SPSS.13.0统计软件进行数据分析处理,采用x2检验分析PTK7的表达、PTK7与食管鳞癌患者年龄、性别、肿瘤分化程度和浸润深度、有无淋巴结转移等临床病理因素的关系。P<0.05为有统计学意义,采用Kaplan-meier生存曲线分析及两组生存时间的比较采用log-rank检验,了解PTK7表达与生存率的关系,P<0.05为有统计学意义。结果：1、80例食管鳞状细胞癌组织中45例PTK7的表达阳性,63例癌旁组织(包括正常组织细胞及不典型细胞增生)均无PTK7表达,经x2检验,PTK7表达有统计学意义(P<0.001)PTK7的阳性产物主要定位于癌组织中靠近细胞膜的胞浆部分表达明显,少数也可见于细胞膜,呈棕黄色颗粒。2、食管鳞状细胞癌组织中PTK7的蛋白表达与临床参数包括患者年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤的分化程度、肿瘤浸润深度、淋巴结转移、临床分期等进行分析,经x2检验,均无统计学意义(P>0.05)。3、食管癌组织中PTK7蛋白表达在80例食管鳞癌患者进行生存分析,其中阳性45例,阴性35例。进行60个月的生存分析,两者之间差异不明显,无统计学意义(P>0.05)。当设定肿瘤组织PTK7蛋白表达综合免疫组化评分≥5分时为阳性,<5分为阴性,阳性14例,阴性66例,阳性者5年生存率稍微下降(χ2=3.350P=0.060)。结论：PTK-7表达与食管鳞癌有一定的关系,而食管癌旁不典型增生及正常鳞状上皮均无表达；食管鳞状细胞癌组织中PTK7的蛋白表达与临床参数包括患者年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤的分化程度、肿瘤浸润深度、淋巴结转移、临床分期均无相关性；对PTK7蛋白表达的食管鳞状细胞癌患者进行生存分析。两者之间差异不明显,无统计学意义；但当肿瘤组织PTK7蛋白表达综合免疫组化评分≥5分与低于5分进行比较分析,5年生存率稍微下降。有助于综合判断食管鳞癌的相关性和临床预后。